Question

【題目】以下是有關(guān)DNA粗提取實(shí)驗(yàn)的閱讀材料：

A．核酸極不穩(wěn)定，在較為劇烈的化學(xué)、物理因素和酶的作用下很容易降解。在制備DNA時要加入DNA酶(水解DNA的酶)的抑制劑檸檬酸鈉，以除去Mg，防止DNA酶的激活。

B．核酸中的DNA和RNA在生物體內(nèi)均以核蛋白(由核酸和蛋白質(zhì)組成)的形式存在， DNA核蛋白在1mol·L-1 NaCl溶液中溶解度很大，但在0.14mol·L-1 NaCl溶液中的溶解度很低；而RNA核蛋白溶于0.14mol·L-1 NaCl溶液。

C．用苯酚處理，可使蛋白質(zhì)變性，且留在苯酚層內(nèi)；在DNA溶液中加入2.5倍體積，濃度為95％的酒精，可將DNA分離出來。此時DNA十分粘稠，可用玻棒攪成團(tuán)取出。

D．DNA在強(qiáng)酸環(huán)境下，水解產(chǎn)生脫氧核糖等小分子物質(zhì)，它與二苯胺酸性溶液反應(yīng)，能生成藍(lán)色化合物。

E．實(shí)驗(yàn)材料與器械：檸檬酸鈉溶液、石英砂、0.015mol·L-1 NaCl溶液、1mol·L-1 NaCl溶液、蒸餾水、苯酚、95％酒精、二苯胺試劑、濃硫酸、花椰菜、研缽、燒杯、漏斗、玻棒、量筒、石棉網(wǎng)、酒精燈、吸管、試管等。

F．實(shí)驗(yàn)步驟：研磨得勻漿→過濾得濾液→濾液稀釋6倍→離心處理得沉淀物 →沉淀物再溶解→加苯酚靜置后去上清液→提取出DNA→DNA鑒定

請閱讀以上材料回答下列問題：

（1）研磨時，取10g花椰菜，加適量的石英砂和____________ 、____________；

（2）將濾液稀釋6倍，其目的___________________________________________；

（3）離心后得的沉淀物主要是：_____________________________；

（4）取沉淀物，置于2mL 1mol·L-1 NaCl 溶液中，使DNA核蛋白再次溶解，再加2mL苯酚充分震蕩后靜止，待其分層后棄其上層的苯酚。該步驟的目的是除去__________；

（5）如何將剩余溶液中的DNA提取出來? _________________________________；

（6）如何證明提取物確實(shí)是DNA分子? ___________________________。

Answer 1

【答案】檸檬酸鈉溶液 1mol·L-1 NaCl溶液 降低溶液濃度，降低DNA的溶解度，使DNA充分沉淀 DNA蛋白質(zhì) 蛋白質(zhì) 緩緩地加入2.5倍體積，濃度為95％的酒精，可將DNA分離出來 取兩支試管，各加入0.015mol·L-1 NaCl溶液5mL，并將上述提取物放入其中一支試管中，用玻棒攪拌，使之溶解。再向兩支試管中各加入4mL二苯胺，置于沸水浴中，加熱5min，發(fā)現(xiàn)加入提取物的這支試管溶液呈藍(lán)色，即能證明提取物為DNA

【解析】

DNA粗提取和鑒定的原理：（1）DNA的溶解性：DNA和蛋白質(zhì)等其他成分在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精溶液，但細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)溶于酒精；DNA對酶、高溫和洗滌劑的耐受性；（2）DNA的鑒定：在沸水浴的條件下，DNA遇二苯胺會被染成藍(lán)色。

（1）研磨時，加入少量的石英砂是為了增大摩擦，加入研磨的速度，加入1mol·L-1 NaCl溶液是為了溶解核DNA，加入檸檬酸鈉溶液是為了保護(hù)DNA不被破壞。

（2）在0.14mol·L-1 NaCl溶液中，DNA核蛋白質(zhì)溶解度最少，所以要將1mol·L-1 NaCl溶液稀釋，使DNA核蛋白質(zhì)析出。

（3）離心后得的沉淀物主要是：DNA蛋白質(zhì)。

（4）前一步提取的是DNA核蛋白，而需要的是DNA，因此需要把DNA核蛋白進(jìn)一步提純。用苯酚處理，可使蛋白質(zhì)變性，而且留在苯酚層內(nèi)，用這樣的方法可以去除蛋白質(zhì)。

（5）根據(jù)題中所給的信息，在DNA溶液中加入2.5倍體積，體積分?jǐn)?shù)為95%乙醇，可將DNA分離出來，可用攪拌成團(tuán)取出。

（6）取兩支試管，各加入0.015mol·L-1 NaCl溶液5mL，并將上述提取物放入其中一支試管中，用玻棒攪拌，使之溶解。再向兩支試管中各加入4mL二苯胺，置于沸水浴中，加熱5min，發(fā)現(xiàn)加入提取物的這支試管溶液呈藍(lán)色，即能證明提取物為DNA。