Question

下圖是轉基因抗鹽煙草的培育過程．請分析回答下列問題：

（1）①過程獲得的抗鹽基因可用PCR技術進行擴增，該技術須用

 

酶，所需的原料是

 

．
（2）已知幾種限制酶識別序列及其切割位點（如下表）：

用圖中的質粒和目的基因構建重組DNA分子，不能使用SmaⅠ酶切割，原因是

 

．
圖中②過程為防止質粒和含目的基因的外源DNA片段自身環(huán)化，應選用

 

酶對外源DNA、質粒進行切割．
（3）圖中④過程為篩選出導入了重組DNA分子的農(nóng)桿菌，應在培養(yǎng)基中加

 

．
（4）為確定轉基因抗鹽煙草是否培育成功，既要用放射性同位素標記的

 

作探針進行分子雜交檢測，又要在個體水平上鑒定，后者具體過程是

 

．

Answer 1

考點：基因工程的原理及技術

專題：

分析：分析題圖：圖示是轉基因抗鹽煙草的培育過程，其中①表示含有目的基因的外源DNA分子；②表示DNA分子；③表示基因表達載體的構建過程；④表示采用農(nóng)桿菌轉化法將目的基因導入受體細胞；⑤表示脫分化過程；⑥表示再分化過程．

解答： 解：（1）用PCR技術擴增目的基因的條件：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）．
（2）由圖可知，使用SmaI酶切割，將會破壞質粒的抗性基因（標記基因），同時也會破壞目的基因片段，因此用圖中的質粒和目的基因構建重組DNA分子時，不能使用SmaⅠ酶切割．標記基因和外源DNA目的基因中均含有EcoRⅠ酶切位點，用該酶切割，再在DNA連接酶的作用下，可形成3種環(huán)狀產(chǎn)物，即外源DNA自身連接、質粒自身連接、外源DNA和質粒連接，因此為了防止目的基因的外源DNA片段和質粒自身環(huán)化，應選用BamhHI和HindⅢ酶對外源DNA和質粒進行切割，這樣使目的基因兩端的黏性末端不同，可以防止自身環(huán)化．
（3）由圖可知，標記基因是M抗生素抗性基因，因此圖中④過程為篩選出導入了重組DNA分子的農(nóng)桿菌，應在培養(yǎng)基中加M抗生素．
（4）為確定轉基因抗鹽煙草是否培育成功，既要用放射性同位素標記的目的基因作探針進行分子雜交檢測，又要在個體水平上鑒定，即用蟲子感染轉基因香蕉，觀察是否抗蟲．
故答案為：
（1）熱穩(wěn)定DNA聚合酶     脫氧核苷酸
（2）使用SmaI酶切割，將會破壞質粒的抗性基因（標記基因），同時也會破壞目的基因片段    BamhHI和HindⅢ酶
（3）M抗生素
（4）目的基因     用蟲子感染轉基因香蕉，觀察是否抗蟲

點評：本題結合圖解，考查基因工程的原理及技術，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中的相關細節(jié)，能正確分析題圖，再結合所學的知識準確答題，屬于考綱識記和理解層次的考查．