Question

14．家蠶細(xì)胞具有高效表達(dá)外源基因的能力．將人干擾素基因?qū)�入家蠶細(xì)胞并大規(guī)模培養(yǎng)，可提取干擾素用于制藥．
（1）進(jìn)行轉(zhuǎn)基因操作前，需用胰蛋白（或膠原蛋白）酶短時(shí)處理幼蠶組織，以便獲得單個(gè)細(xì)胞．
（2）為使干擾素基因在家蠶細(xì)胞中高效表達(dá)，需要把來自cDNA文庫(kù)的干擾素基因片段正確插入表達(dá)載體的啟動(dòng)子和終止子之間．
（3）采用PCR技術(shù)可驗(yàn)證干擾素基因是否已經(jīng)導(dǎo)入家蠶細(xì)胞．該P(yáng)CR反應(yīng)體系的主要成分應(yīng)包含：擴(kuò)增緩沖液（含Mg²⁺）、水、4種脫氧核糖核苷酸、模板DNA、引物和Taq 酶（熱穩(wěn)定DNA聚合酶．

Answer 1

分析 1、基因工程的基本操作步驟主要包括四步：①目的基因的獲��；②基因表達(dá)載體的構(gòu)建；③將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞；④目的基因的檢測(cè)與表達(dá)．從分子水平上檢測(cè)目的基因的方法：（1）分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．
2、PCR技術(shù)的條件：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對(duì)引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）等．

解答 解：（1）為了使動(dòng)物組織分散開為單個(gè)細(xì)胞通常用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理．
（2）基因表達(dá)載體包括啟動(dòng)子、終止子、目的基因和標(biāo)記基因．啟動(dòng)子位于目的基因的首端，終止子位于目的基因的尾端．
（3）PCR反應(yīng)體系的主要成分應(yīng)該包含：擴(kuò)增緩沖液（含Mg²⁺）、水、4種脫氧核糖苷酸、模板DNA、TaqDNA聚合酶和一對(duì)DNA引物；在PCR反應(yīng)過程中，有一個(gè)環(huán)節(jié)是從較高的溫度冷卻到相對(duì)較低的55℃左右，其作用讓引物結(jié)合到互補(bǔ)DNA鏈上，形成局部雙鏈．
故答案為：
（1）胰蛋白（或膠原蛋白）　
（2）啟動(dòng)子　終止子
（3）脫氧核糖核苷酸  引物　Taq 酶（熱穩(wěn)定DNA聚合酶）

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程、細(xì)胞工程等相關(guān)知識(shí)，著重識(shí)記動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和PCR技術(shù)的有關(guān)內(nèi)容，意在考查考生的識(shí)記能力和應(yīng)用能力，屬于容易題．