Question

（12分）多環(huán)芳烴菲在染料、殺蟲劑等生產(chǎn)過程中被廣泛使用，是土壤、河水中常見的污染物之一。下圖表示科研人員從被石油污染的土壤中分離獲得能降解多環(huán)芳烴菲的菌株Q的主要步驟。請回答：

（1）步驟①→③的培養(yǎng)過程中，需將錐形瓶放在搖床上振蕩，一方面使菌株與培養(yǎng)液充分接觸，提高營養(yǎng)物質(zhì)的利用率；另一方面能 。

（2）步驟④用平板劃線法純化菌株Q過程中，在做第二次以及其后的劃線操作時(shí)，總是從上一次劃線的末端開始劃線，原因是 ，同時(shí)需要相同條件下培養(yǎng)不接種的培養(yǎng)基平板做對照，采用固體平板培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)要倒置培養(yǎng)，其目的是 。

（3）接種環(huán)通過灼燒滅菌，完成步驟④中劃線操作，共需灼燒接種環(huán) 次。

（4）為了獲得分解多環(huán)芳烴菲能力更強(qiáng)的菌株，研究人員又對菌種Q進(jìn)行了誘變處理，得到突變株K。為了進(jìn)一步鑒定菌株K并比較兩種菌株降解多環(huán)芳烴菲的能力，設(shè)計(jì)了下列實(shí)驗(yàn)，請補(bǔ)全實(shí)驗(yàn)步驟：

①取9只錐形瓶均分成三組，編號(hào)A、B、C

②向A、B、C三組錐形瓶中加入 的培養(yǎng)液。

③向A、B、C三組培養(yǎng)液中分別加入 。

④28℃恒溫培養(yǎng)3天后，測定 。

Answer 1

（1）增加培養(yǎng)液中的溶氧量（或增加培養(yǎng)液中的含氧量）

（2）線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少（或能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落）

防止冷凝后形成的水珠滴落在培養(yǎng)基上污染培養(yǎng)基（或避免培養(yǎng)基中水分的過快揮發(fā)）

（3）6

（4）②等量的以多環(huán)芳烴菲為唯一碳源

③等量的無菌水、菌株Q菌液和突變株K菌液

④錐形瓶中多環(huán)芳烴菲的降解率

【解析】

試題分析：（1）步驟①→③的培養(yǎng)過程中，需將錐形瓶放在搖床上振蕩，目的有兩個(gè)，一方面使菌株與培養(yǎng)液充分接觸，提高營養(yǎng)物質(zhì)的利用率；另一方面能增加培養(yǎng)液中的溶氧量．

（2）步驟④用平板劃線法純化菌株Q過程中，由于線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，所以在做第二次以及其后的劃線操作時(shí)，總是從上一次劃線的末端開始劃線．采用固體平板培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)要倒置培養(yǎng)的目的是防止冷凝后形成的水珠滴落在培養(yǎng)基上污染培養(yǎng)基．

（3）接種環(huán)在每次接種前和接種結(jié)束后都要通過灼燒來滅菌，所以完成步驟④中5次劃線操作前都要灼燒滅菌，接種結(jié)束后還需灼燒滅菌1次，防止造成污染，由此可見，完成步驟④共需灼燒接種環(huán)6次．

（4）本實(shí)驗(yàn)的目的是比較兩種菌株降解多環(huán)芳烴菲的能力．實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)需要遵循對照原則，對照組需加入等量無菌水；還需遵循單一變量原則，單一變量是菌種類比不同，即菌株Q菌液和突變株K菌液，所以實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)如下：

①取9只錐形瓶均分成三組，編號(hào)A、B、C

②向9支錐形瓶中分別加入等量以多環(huán)芳烴菲為唯一碳源的培養(yǎng)液．

③向A、B、C三組培養(yǎng)液中分別加入等量的無菌水、菌株Q菌液和突變株K菌液．

④28℃恒溫培養(yǎng)3天后，測定錐形瓶中多環(huán)芳烴菲的降解率．

考點(diǎn)：本題主要考查微生物的分離與培養(yǎng)的相關(guān)知識(shí)，意在考察考生對相關(guān)知識(shí)的理解。把握知識(shí)間內(nèi)在聯(lián)系的能力。