Question

回答有關(guān)基因工程的問題：
（1）構(gòu)建基因工程表達(dá)載體時(shí)，用不同類型的限制酶切割DNA后，可能產(chǎn)生粘性末端，也可能產(chǎn)生

 

末端．若要在限制酶切割目的基因和質(zhì)粒后使其直接進(jìn)行連接，則應(yīng)選擇能使二者產(chǎn)生

 

（相同，不同）粘性末端的限制酶．
（2）利用大腸桿菌生產(chǎn)人胰島素時(shí)，構(gòu)建的表達(dá)載體含有人胰島素基因及其啟動(dòng)子等，其中啟動(dòng)子的作用是

 

．在用表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌時(shí)，常用

 

處理大腸桿菌，以利于表達(dá)載體進(jìn)入：為了檢測(cè)胰島素基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，可用標(biāo)記的胰島素基因片段作探針與mRNA雜交，該雜交技術(shù)稱為

 

．為了檢測(cè)胰島素基因轉(zhuǎn)錄的mRNA是否翻譯成

 

，常用抗原-抗體雜交技術(shù)．
如果要將某目的基因通過農(nóng)桿菌傳話法導(dǎo)入植物細(xì)胞，先要將目睹基因插入農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的

 

中，然后用該農(nóng)桿菌感染植物細(xì)胞，通過DNA重組將目的基因插入植物細(xì)胞的

 

上．

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的原理及技術(shù),基因工程的應(yīng)用

專題：

分析：基因工程操作的工具是限制性內(nèi)切酶、DNA連接酶和運(yùn)載體；基因工程操作的步驟為提取目的基因、目的基因與運(yùn)載體結(jié)合、將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞、目的基因的檢測(cè)與表達(dá)．目的基因的檢測(cè)有多種手段，如①DNA分子雜交技術(shù)；②分子雜交技術(shù)；③抗原-抗體雜交技術(shù)．

解答： 解：（1）用限制酶切割DNA后，可能產(chǎn)生黏性末端，也可能產(chǎn)生平口末端．若要在限制酶基因工程中，往往采用同種限制酶切割目的基因和質(zhì)粒以產(chǎn)生相同的黏性末端，再用DNA連接酶使其直接進(jìn)行連接．
（2）RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位是啟動(dòng)子．將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞時(shí)，常用Ca²⁺處理微生物細(xì)胞，使其成為易于吸收周圍環(huán)境中DNA分子的感受態(tài)細(xì)胞，以利于表達(dá)載體進(jìn)入．為了檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，可采用分子雜交技術(shù)，即用放射性同位素標(biāo)記的胰島素基因作探針與mRNA雜交；了檢測(cè)目的基因轉(zhuǎn)錄的mRNA是否翻譯成蛋白質(zhì)，可采抗原--抗體雜交技術(shù)．
（3）采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞時(shí)，先要將目的基因插入農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的T-DNA中，然后用該農(nóng)桿菌感染植物細(xì)胞，通過DNA重組將目的基因插入植物細(xì)胞的染色體DNA上．
故答案為：
（1）平   相同  
（2）提供RNA聚合酶特異性識(shí)別結(jié)合位點(diǎn)，驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄  Ca²⁺DNA-RNA分子雜交  胰島素原（蛋白質(zhì)）  
（3）T-DNA   染色體

點(diǎn)評(píng)：本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，只要考生識(shí)記基因工程的工具和操作步驟即可正確答題，屬于考綱識(shí)記層次的考查，此類試題，需要考生在平時(shí)的學(xué)習(xí)過程中學(xué)會(huì)構(gòu)建知識(shí)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)．