Question

人類細胞內(nèi)有相當于R的結(jié)構(gòu)，它就是位于線粒體中的mtDNA．若用兩種識別切割序列完全不同的限制酶，M和N切割線粒體mtDNA，通過凝膠電泳分離分析得下表．限制酶M和N的識別序列和切割位點如圖．

凝膠電泳結(jié)果 （1kb=1000對堿基）（+表示該片段的存在以及含量）
分子量（kb）	酶M	酶N	酶M+酶N	分子量（kb）	酶M	酶N	酶M+酶N
1.0	+		+	6.0			+
2.0			+	7.0		+
3.0			+	9.0		+
4.0			+	10.0	+
5.0	+

（1）該mtDNA的長度為

 

kb．在該DNA分子中，M酶與N酶的切割位點分別有

 

個．
（2）M酶與N酶切出的能相互粘連的末端能在

 

酶的作用下相互連接，請將連接的結(jié)果表示出來：

 

．連接后的序列是否可以用M酶、N酶進行切割，并簡述理由：

 

．

Answer 1

考點：基因工程的原理及技術(shù)

專題：

分析：分析表格和審清題意是解答本題的切入點．題干中提出，mtDNA是存在于人類細胞線粒體中雙鏈閉合環(huán)狀的DNA分子，因此限制酶在切割時，用酶M得到3個片段，則有3個切點，用酶N得到2個片段，則有2個切點．圖1中可以看出，兩種限制酶切割形成的黏性末端相同，因此可以在DNA連接酶的作用下相互連接．由于酶的專一性，連接后不能再用M酶、N酶進行切割，因為連接后的序列不是M酶和N酶所能識別的特定的堿基序列．

解答： 解：（1）該mtDNA為環(huán)狀DNA，用酶M得到3個片段，則有3個切點，用酶N得到2個片段，則有2個切點．用酶N切割得到2個片段的長度分別為7和9，則該mtDNA的長度為16Kb．
（2）M酶和N酶切割能得到相同的黏性末端，可以用DNA連接酶催化連接；結(jié)合圖1可知，連接后的結(jié)果為．當連接后，沒有了M酶和N酶所能識別的特定的堿基序列，因此兩種酶不能再切割了．
故答案為：
（1）16        3、2
（2）DNA連接酶

否，連接后的序列不是M酶和N酶所能識別的特定的堿基序列

點評：本題結(jié)合圖表，考查基因工程的原理及技術(shù)，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟，掌握各步驟的細節(jié)，能結(jié)合圖中和表中信息準確答題，屬于考綱識記和理解層次的考查．