Question

苦馬豆素（SW）最早是從植物灰苦馬豆中分離獲得，為了研究SW是否具有抑制腫瘤細胞生長的作用，許多學者做了大量研究，實驗過程及實驗結果如下：
①取小鼠肝癌Hepal-6細胞．
②制成單細胞懸液，等量接種于多孔板，加入等量培養(yǎng)液，每組設5個平行孔．
③于37℃、5%CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h．
④加入等量不同濃度的SW溶液，于37℃、5%CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)．
⑤分別在24h、48h、72h時吸取培養(yǎng)液，觀察記錄結果，得到不同濃度的SW對細胞存活率的影響曲線如圖所示．
⑥將培養(yǎng)48h的培養(yǎng)液離心，細胞染色，在熒光顯微鏡下觀察拍照，記錄正常細胞和凋亡細胞的數(shù)目，并采用免疫熒光細胞技術檢測細胞凋亡蛋白Bax和Bcl-2的表達量狀況，匯總統(tǒng)計結果如下表．
培養(yǎng)48h后細胞數(shù)目及凋亡蛋白Bax和Bcl-2的表達狀況

SW（μg/ml）	癌細胞數(shù)目	凋亡細胞數(shù)目	Bax蛋白	Bcl-2蛋白
2	+	++++	++++	+
1	++	+++	+++	++
0.5	+++	++	++	+++
0	++++	+	+	++++

注：“+”的數(shù)量表示相對值的大小
回答下列問題：
（1）實驗中首先將小鼠肝癌Hepal-6細胞制成單細胞懸液，于37℃、5%CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)的目的是

 

．培養(yǎng)箱中要有適量的無菌空氣，原因是

 

．肝癌細胞懸液中細胞有懸浮生長的特征，可能的原因是

 

．
（2）實驗中利用多孔板培養(yǎng)時，每組設置5個平行孔同時進行培養(yǎng)，計數(shù)后統(tǒng)計平均值是為了

 

．
（3）分析圖中曲線可知，SW對肝癌Hepal-6細胞的作用效果是：①

 

；②

 

．
（4）表中結果說明SW可以誘發(fā)細胞

 

，從而抑制腫瘤細胞生長，從分子水平上分析，SW可能是導致癌細胞內(nèi)

 

的合成量增加．

Answer 1

考點：動物細胞與組織培養(yǎng)過程

專題：

分析：分析表格：隨著SW濃度的增加，癌變的細胞減少，凋亡的細胞增多，可以得出SW可以誘導細胞凋亡；同時，可以看出Bax蛋白隨著SW濃度增加而增加，Bcl-2蛋白著SW濃度增加而減少．
分析曲線圖：SW濃度越高，對細胞生長（存活）的抑制作用越強；SW作用時間越長，對細胞生長（存活）的抑制作用越強．

解答： 解：（1）動物細胞培養(yǎng)，制成單個細胞，防止接觸抑制，給予適宜的環(huán)境，目的是讓細胞增殖．培養(yǎng)箱中要有適量的無菌空氣，是因為細胞的生長需要進行有氧呼吸．癌細胞的特點之一是糖蛋白減少，細胞黏著性降低．
（2）實驗中利用多孔板培養(yǎng)時，每組設置5個平行孔同時進行培養(yǎng)，計數(shù)后統(tǒng)計平均值是為了減小偶然誤差并使實驗結果更可信．
（4）相同作用時間，不同SW濃度對小鼠肝癌Hepal-6細胞有抑制，且隨著SW濃度增加，抑制作用增強；同一SW濃度，不同作用時間對對小鼠肝癌Hepal-6細胞有抑制，且隨著SW作用時間增加，抑制作用增強．
（5）分析曲線圖可知：SW濃度越高，對細胞生長（存活）的抑制作用越強；SW作用時間越長，對細胞生長（存活）的抑制作用越強，誘發(fā)細胞凋亡；從分子水平上分析，可能是由于SW導致癌細胞內(nèi)Bax蛋白合成量增多．
故答案：
（1）細胞增殖（細胞分裂、細胞克�。�             細胞需進行有氧呼吸         癌細胞表面糖蛋白減少，細胞黏著性小
（2）減小偶然性誤差（并使實驗結果更可信）
（3）SW濃度越高，對細胞生長（存活）的抑制作用越強        （SW）作用時間越長，對細胞生長（存活）的抑制作用越強
（4）凋亡      Bax蛋白

點評：本題結合圖表，考查動物的細胞培養(yǎng)與體細胞克隆，意在考查考生具有對一些生物學問題進行初步探究的能力，具備驗證簡單生物學事實的能力，并能對實驗現(xiàn)象和結果進行解釋、分析和處理．動物細胞工程常用的技術手段有動物細胞培養(yǎng)、動物細胞融合、單克隆抗體、胚胎移植、核移植等，其中動物細胞培養(yǎng)技術是其他動物細胞工程技術的基礎．