Question

肺細(xì)胞中的let-7基因表達(dá)減弱，癌基因RAS表達(dá)增強(qiáng)，會(huì)引發(fā)肺癌．研究人員利用基因工程技術(shù)將let-7基因?qū)�入肺癌�?xì)胞實(shí)現(xiàn)表達(dá)，發(fā)現(xiàn)肺癌細(xì)胞的增殖受到抑制．該基因工程技術(shù)基本流程如圖1．研究發(fā)現(xiàn)，let-7基因能影響癌基因RAS的表達(dá)，其影響機(jī)理如圖2．請回答下列問題：
（1）基因工程的步驟中，過程①為

 

；進(jìn)行過程②時(shí)，需用

 

酶處理貼附在培養(yǎng)皿壁上的細(xì)胞，以利于細(xì)胞培養(yǎng)．
 （2）let一7基因需采用PCR技術(shù)擴(kuò)增時(shí)，PCR反應(yīng)體系的主要成分包含：擴(kuò)增緩沖液（含Mg²⁺）、水，4種脫氧核糖核苷酸、模板DNA、耐高溫的DNA聚合酶和引物1和引物Ⅱ等，其中，模板DNA是指

 

．若在該反應(yīng)體系中，DNA擴(kuò)增了5代，則具有引物I的DNA所占的比例理論上為

 

．
（3）直接檢測let一7基因是否轉(zhuǎn)錄，可從細(xì)胞中提取

 

進(jìn)行分子雜交，肺癌細(xì)胞增殖受到抑制，可能是由于細(xì)胞中l(wèi)et一7基因d 轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物與

 

結(jié)合，從而導(dǎo)致

 

含量減少引起的．這種基因的表達(dá)調(diào)控屬于

 

水平的調(diào)控．
（4）現(xiàn)有一長度為1000堿基對（bp）的DNA分子，用限制酶切開后得到仍是長度為1000bp的DNA分子，說明此DNA分子的形態(tài)為

 

．

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的原理及技術(shù)

專題：

分析：析圖1：圖1表示利用基因工程技術(shù)將let一7基因?qū)�入肺癌�?xì)胞的流程，其中①表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程；②表示用胰蛋白酶處理組織細(xì)胞，使之成為單個(gè)細(xì)胞，再加細(xì)胞懸液進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)的過程．
分析圖2：圖2表示let-7基因影響癌基因RAS的表達(dá)的原理，let-7基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物miRNA與RAS基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物RAS mRNA結(jié)合，使RAS基因翻譯受到抑制，引起細(xì)胞中的RAS蛋白含量減少，進(jìn)而導(dǎo)致癌細(xì)胞增殖受到抑制．

解答： 解：（1）圖中①表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程；②表示動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程，該過程中需要胰蛋白酶處理貼附在培養(yǎng)皿壁上的細(xì)胞，以利于細(xì)胞培養(yǎng)．
 （2）利用PCR技術(shù)體外擴(kuò)增let一7基因時(shí)，所需的模板DNA是指 let-7基因．目的基因擴(kuò)增了5代，共得到32個(gè)DNA分子，除了含有模板DNA鏈的1個(gè)DNA分子外，其余的DNA分子都含有引物I，因此具有引物I的DNA所占的比例為

25-1

25

=

31

32

．
（3）檢測目的基因（let一7基因）是否轉(zhuǎn)錄，可采用分子雜交技術(shù)，即可從細(xì)胞中提取RNA進(jìn)行分子雜交；肺癌細(xì)胞增殖受到抑制的原因是：let-7基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物miRNA與RAS基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物RAS mRNA結(jié)合，使RAS基因翻譯受到抑制，引起細(xì)胞中的RAS蛋白含量減少，進(jìn)而導(dǎo)致癌細(xì)胞增殖受到抑制．
（4）現(xiàn)有一長度為1000堿基對（bp）的DNA分子，用限制酶切開后得到仍是長度為1000bp的DNA分子，說明此DNA分子的形態(tài)為環(huán)狀．
故答案為：
（1）基因表達(dá)載體的構(gòu)建    胰蛋白
（2）let-7基因    

31

32

（3）RNA    RASmRNA    RAS蛋白質(zhì)    翻譯
（4）環(huán)狀

點(diǎn)評：分析題圖：圖1表示利用基因工程技術(shù)題考查基因工程的原理和技術(shù)、遺傳信息的轉(zhuǎn)錄和翻譯的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的工具和操作步驟，能分析圖1，準(zhǔn)確判斷各過程的名稱；掌握遺傳信息的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)過程，能利用圖2信息答題．