Question

10．紫杉醇具有獨(dú)特的抗腫瘤作用．研究人員從紅豆杉中發(fā)現(xiàn)了一種具有產(chǎn)紫杉醇能力的內(nèi)生真菌．為探究制備紅豆杉內(nèi)生真菌原生質(zhì)體（不含細(xì)胞壁）的適宜pH和溫度，進(jìn)行了如下實(shí)驗(yàn)：①培養(yǎng)菌株，離心收集菌絲體，并用滲透壓穩(wěn)定劑洗滌兩次；②將獲得的菌絲體，分別置于不同pH或溫度的培養(yǎng)液中，并加入適量酶液，震蕩、搖勻后，每隔一段時(shí)間，取樣、過(guò)濾、離心，用滲透壓穩(wěn)定劑洗滌兩次后，收集純化的原生質(zhì)體．③統(tǒng)計(jì)原生質(zhì)體數(shù)量，結(jié)果如下．

酶解溫度（℃）	原生質(zhì)體產(chǎn)量（×106個(gè)/mL）
25	12
28	22
32	31
35	26

分析回答：
（1）步驟②中，加酶液的目的是去除內(nèi)生真菌的細(xì)胞壁，洗滌時(shí)選用滲透壓穩(wěn)定劑的理由是維持原生質(zhì)體的正常形態(tài)，防止其破裂．
（2）結(jié)果表明，制備紅豆杉內(nèi)生真菌原生質(zhì)體的適宜條件是溫度為32℃pH為5、酶解時(shí)間3～4小時(shí)．
（3）檢驗(yàn)原生質(zhì)體再生能力，需要配制再生固體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基滅菌后需要冷卻到50℃左右才能用來(lái)倒平板．
（4）實(shí)驗(yàn)中將收集到的原生質(zhì)體濃度為30×10⁶個(gè)/mL培養(yǎng)液先稀釋10⁴倍，再各取0.1mL稀釋液分別均勻涂布在3個(gè)再生固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)．一段時(shí)間后，統(tǒng)計(jì)得到的菌落數(shù)分別為：27、21、24．則原生質(zhì)體再生率（能再生的原生質(zhì)體數(shù)占全部原生質(zhì)體的比例）約為8%．

Answer 1

分析 1、通常把去除細(xì)胞壁的活細(xì)胞稱為原生質(zhì)體．
2、分析題圖和題表：由題圖可知原生質(zhì)體的產(chǎn)量最高時(shí)的條件為：pH值=5，酶解時(shí)間在3～4小時(shí)（或酶解時(shí)間在3.5小時(shí)左右）；由題表可知原生質(zhì)體的產(chǎn)量最高時(shí)的條件為：酶解溫度為32℃．

解答 解：（1）原生質(zhì)體是沒(méi)有細(xì)胞壁的活細(xì)胞，而真菌有細(xì)胞壁，步驟②中加酶后可去除內(nèi)生真菌的細(xì)胞壁，獲得真菌的原生質(zhì)體；真菌的細(xì)胞壁在洗滌時(shí)容易遭到破壞，洗滌時(shí)選用滲透壓穩(wěn)定劑可維持原生質(zhì)體的正常形態(tài)，防止其破裂．
（2）由題圖和題表可知，制備紅豆杉內(nèi)生真菌原生質(zhì)體的適宜條件有：溫度為32℃、pH為5、酶解時(shí)間3～4小時(shí)（或酶解時(shí)間3.5小時(shí)左右）．
（3）培養(yǎng)基滅菌后需要冷卻后才能倒平板，倒平板時(shí)培養(yǎng)基的溫度要下降到不燙手，大約在50℃．
（4）實(shí)驗(yàn)中將收集到的原生質(zhì)體濃度為30×10⁶個(gè)/mL培養(yǎng)液先稀釋l0⁴倍，原生質(zhì)體濃度為3000個(gè)/mL，取0.1mL稀釋液，得到30個(gè)．但實(shí)際測(cè)得是27、21、24．平均值是24，所以原生質(zhì)體再生率=24÷0.1÷3000=0.08=8%．
故答案為：
（1）去除內(nèi)生真菌的細(xì)胞壁     維持原生質(zhì)體的正常形態(tài)，防止其破裂
（2）溫度為32℃pH為5     酶解時(shí)間3～4小時(shí)（或酶解時(shí)間3.5小時(shí)左右）
（3）50℃
（4）8%

點(diǎn)評(píng) 本題主要考查微生物培養(yǎng)的相關(guān)知識(shí)，考生識(shí)記微生物培養(yǎng)的條件、正確解讀和分析題圖和題表是解題的關(guān)鍵．