Question

【題目】內(nèi)皮素（ET）是一種多肽，它有促進(jìn)血管收縮和平滑肌細(xì)胞增殖等作用。內(nèi)皮素主要通過(guò)與靶細(xì)胞膜上的內(nèi)皮素受體（ETA）結(jié)合而發(fā)揮生理效應(yīng)。科研人員通過(guò)構(gòu)建基因的表達(dá)載體，實(shí)現(xiàn)ETA基因在細(xì)胞中高效表達(dá)，其過(guò)程如下（圖中SNAP基因是一種熒光蛋白基因，限制酶ApaⅠ的識(shí)別序列為C↓CCGGG，限制酶XhoⅠ的識(shí)別序列為C↓TCGAG）。請(qǐng)分析回答：

（1）完成過(guò)程①需要的酶是___________；過(guò)程①的最后階段要將反應(yīng)體系的溫度升高到95℃，其目的是使RNA鏈和________鏈分開(kāi)。

（2）過(guò)程③中，限制酶XhoⅠ切割DNA，使_________鍵斷開(kāi)，形成目的基因的黏性末端是_____________（選填“TCGA-”或“-TCGA”）。用______種限制酶切割，獲得不同的黏性末端，其主要目的是使目的基因定向連接到載體上或防止目的基因和質(zhì)粒自身環(huán)化。

（3）過(guò)程⑥是否成功導(dǎo)入，可將大腸桿菌培養(yǎng)在含有_____________的培養(yǎng)基中進(jìn)行篩選。

（4）內(nèi)皮素能刺激黑色素細(xì)胞的分化、增殖并激活酪氨酸酶的活性，從而使黑色素急劇增加。美容時(shí)可以利用注射ETA達(dá)到美白祛斑效果，這是因?yàn)?/span>ETA能與內(nèi)皮素結(jié)合，減少了內(nèi)皮素與黑色素細(xì)胞膜上________的結(jié)合，抑制了黑色素細(xì)胞的增殖和黑色素的形成。

Answer 1

【答案】逆轉(zhuǎn)錄酶（反轉(zhuǎn)錄酶） cDNA（DNA、脫氧核苷酸） 磷酸二酯 TCGA-（或-AGCT） 兩（2、不同） 氨芐青霉素 特異性受體（受體、內(nèi)皮素受體）

【解析】

基因工程又稱(chēng)基因拼接技術(shù)或DNA重組技術(shù)，是以分子遺傳學(xué)為理論基礎(chǔ)，以分子生物學(xué)和微生物學(xué)的現(xiàn)代方法為手段，將不同來(lái)源的基因按預(yù)先設(shè)計(jì)的藍(lán)圖，在體外構(gòu)建雜種DNA分子，然后導(dǎo)入活細(xì)胞，以改變生物原有的遺傳特性、獲得新品種、生產(chǎn)新產(chǎn)品。

基因工程的操作步驟：1.提取目的基因；2.目的基因與運(yùn)載體結(jié)合；3. 將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞；4.目的基因的檢測(cè)和表達(dá)。

（1）過(guò)程①根據(jù)mRNA合成cDNA，為逆轉(zhuǎn)錄的過(guò)程，需要逆轉(zhuǎn)錄酶的催化。過(guò)程①的最后階段要將反應(yīng)體系的溫度升高到95℃，其目的是破壞堿基之間形成的氫鍵，使RNA鏈和cDNA鏈分開(kāi)。

（2）限制酶切割DNA，使磷酸二酯鍵斷開(kāi)，得到粘性末端，根據(jù)限制酶XhoⅠ的識(shí)別序列為C↓TCGAG，可以看出粘性末端為TCGA-或-AGCT。用兩種限制酶切割，獲得不同的黏性末端，其主要目的是使目的基因定向連接到載體上或防止目的基因和質(zhì)粒自身環(huán)化。

（3）可以看出基因表達(dá)載體中的標(biāo)記基因?yàn)榭拱逼S青霉素基因，確定是否導(dǎo)入成功可以直接用氨芐青霉素進(jìn)行檢測(cè)。

（4）ETA能與內(nèi)皮素結(jié)合，減少了內(nèi)皮素與黑色素細(xì)胞膜上受體的結(jié)合，可以減弱內(nèi)皮素的作用，降低細(xì)胞中黑色素的形成，起到美白的作用。