Question

4．人乳鐵蛋白是一種重要的藥用保健蛋白．如圖表示利用乳腺生物反應器生產(chǎn)人乳鐵蛋白的過程，圖中Tet^r表示四環(huán)素抗性基因，Amp^r表示氨芐青霉素抗性基因，五種限制酶的識別序列及切割位點如表所示，請回答以下問題：

限制酶	BamHⅠ	HaeⅢ	BclⅠ	Sau3AⅠ	NotⅠ
識別序列 及切割位點

（1）①過程常采用的方法是顯微注射法．
（2）構建基因表達載體時，需要將人乳鐵蛋白基因嵌入到啟動子和終止子 之間，這樣人乳鐵蛋白基因就能在乳腺細胞中表達．
（3）要將人乳鐵蛋白基因插入質(zhì)粒，若只允許使用一種限制酶，應選擇的限制酶是Sau3AⅠ．
（4）據(jù)圖分析，篩選含有重組質(zhì)粒的受體細胞首先需要在含氨芐青霉素 （填“四環(huán)素”或“氨芐青霉素”或“四環(huán)素或氨芐青霉素”）的培養(yǎng)基上進行，原因是用限制酶切割后破壞了Tet^r基因，但不會破壞Amp^r基因，導入重組質(zhì)粒的受體細胞（對氨芐青霉素具有抗性），能在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生存下來．
（5）若BamH I酶切的DNA末端與Bcl I酶切的DNA末端連接起來，連接部位的6個堿基對序列為，對于該部位，這兩種酶都不能（“都不能”或“只有一種能”）切開．

Answer 1

分析 分析題圖：圖1是培育表達人乳鐵蛋白的乳腺生物反應器的過程，該過程采用了基因工程技術（目的基因的獲取、基因表達載體的構建、將目的基因?qū)�入受體細胞、目的基因的檢測與表達）、動物細胞培養(yǎng)技術和胚胎移植技術．圖中①表示將目的基因?qū)�入受體細胞；②表示早期胚胎培養(yǎng)；③表示胚胎移植；④表示此時轉(zhuǎn)基因牛；⑤表示從轉(zhuǎn)基因牛中獲取目的基因產(chǎn)物．

解答 解：（1）將目的基因?qū)�入動物細胞最有效的方法是顯微注射法．
（2）構建基因表達載體時，需要將人乳鐵蛋白基因嵌入到啟動子和終止子之間，這樣人乳鐵蛋白基因就能在乳腺細胞中表達．
（3）根據(jù)表中五種酶的識別序列及切割位點可知，限制酶Sau3AI還可以切割限制酶BstⅠ和限制酶BamHⅠ的識別序列，因此要將人乳蛋白基因插入載體，在只允許用一種限制酶酶切載體和人乳鐵蛋白基因的情況下，應選擇限制酶Sau3AI．
（4）據(jù)用限制酶Sau3AI切割后會破壞四環(huán)素抗性基因，但不會破壞氨芐青霉素抗性基因，因此倒入重組質(zhì)粒的受體細胞可能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生存下來．
（5）根據(jù)表格中各種限制酶的識別序列和切割位點可知，若BamH I酶切的DNA末端與Bcl I酶切的DNA末端連接起來，連接部位的6個堿基對序列為 ，對于該部位，這兩種酶都不能切開．
故答案為：
（1）顯微注射法
（2）終止子
（3）Sau3AⅠ
（4）氨芐青霉素     用限制酶切割后破壞了Tet^r基因，但不會破壞Amp^r基因，導入重組質(zhì)粒的受體細胞（對氨芐青霉素具有抗性），能在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生存下來
（5）    都不能

點評 本題結合圖表，考查基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的操作工具及其特點；識記基因工程的操作步驟，掌握其應用，能根據(jù)圖中和表中信息選擇合適的限制酶，再結合所學的知識準確答題．