Question

11．為了研究如何提高油菜種子的含油量，研究者將轉運肽基因與酶D基因相連，導入油菜細胞并獲得了轉基因油菜．請據(jù)圖回答：

（1）研究人采用PCR技術獲取酶D基因和轉運肽基因，該技術是利用DNA復制的原理，使相應基因呈指數(shù)增加．此技術中最重要的酶是耐高溫的DNA聚合酶．三種限制酶（Xbal、Clal、SacI）的切點如圖所示，則用ClaⅠ和DNA連接酶處理兩個基因后，可得到兩基因相連的融合基因．
（2）將上述融合基因插入如圖所示Ti質粒的T-DNA中構建基因表達載體，說明此結構的兩端有XbaⅠ和SacⅠ酶的切割序列．然后把重組質粒導入農(nóng)桿菌中，為了獲得含融合基因的單菌落，應進行的操作是將獲得的農(nóng)桿菌接種在含四環(huán)素的固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，然后再利用液體培養(yǎng)基將該單菌落振蕩培養(yǎng)，可以得到用于轉化的侵染液．
（3）剪取油菜的葉片放入侵染液中一段時間，此過程的目的是利用農(nóng)桿菌將融合基因導入油菜細胞，進一步篩選后獲得轉基因油菜細胞，依據(jù)細胞具有全能性的原理，可將其培育成轉基因油菜植株．
（4）用抗原-抗體雜交法可檢測轉基因油菜植株中的融合基因是否成功表達．

Answer 1

分析 1、基因工程的基本工具：分子手術刀”--限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）、“分子縫合針”--DNA連接酶、“分子運輸車”--載體．
2、基因工程的基本操作程序有四步：①目的基因的獲取，②基因表達載體的構建，③將目的基因導入受體細胞，④目的基因的檢測與鑒定．
3、PCR是一項在生物體外復制特定DNA片段的核酸合成技術，通過這一技術，可在短時間內(nèi)大量擴增目的基因．

解答 解：（1）PCR技術利用的原理是DNA雙鏈復制，從擬南芥基因文庫中獲取轉運肽基因．此技術中最重要的酶是耐高溫的DNA聚合酶．用ClaⅠ限制酶和DNA連接酶處理兩個基因后，可以得到A、D端相連的融合基因．
（2）將上述融合基因插入圖中Ti質粒的T-DNA中，能夠構建表達載體即重組質粒，說明此結構的兩端有XbaⅠ和SacⅠ酶的切割序列．將獲得的農(nóng)桿菌接種在含四環(huán)素的固體平板上培養(yǎng)得到單菌落，再利用液體培養(yǎng)基震蕩培養(yǎng)，可以得到用于轉化的浸染液．
（3）剪取油菜的葉片放入侵染液中一段時間，此過程的目的是利用農(nóng)桿菌將融合基因導入油菜細胞，進一步篩選后獲得轉基因油菜細胞．依據(jù)細胞具有全能性的原理，通過植物組織培養(yǎng)技術，可培育成轉基因油菜植株．
（4）用抗原-抗體雜交法可檢測轉基因油菜植株中的融合基因是否成功表達．
故答案為：
（1）DNA復制   耐高溫的DNA聚合酶   ClaⅠDNA連接
（2）T-DNA XbaⅠSacⅠ將獲得的農(nóng)桿菌接種在含四環(huán)素的固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)
（3）利用農(nóng)桿菌將融合基因導入油菜細胞 細胞具有全能性
（4）抗原-抗體雜交

點評 本題以增加油菜種子的含油量為材料背景，考查基因工程的相關知識，意在考查學生的識圖能力和判斷能力，運用所學知識綜合分析問題和解決問題的能力．