Question

12．綠色熒光蛋白GFP能在藍光或紫外光的激發(fā)下發(fā)出熒光，這樣借助GFP發(fā)出的熒光就可以跟蹤蛋白質在細胞內部的移動情況，幫助推斷蛋白質的功能．如圖為我國首例綠色熒光蛋白（GFP）轉基因克隆豬的培育過程示意圖，據圖回答：

（1）若限制酶Ⅰ的識別序列和切點是-G^↓GATCC-，限制酶Ⅱ的識別序列和切點是-^↓GATC-，在質粒上有酶Ⅰ的一個切點，在目的基因的兩側各有1個酶Ⅱ的切點，在DNA連接酶的作用下，上述兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端能否連接起來可以連接，理由是：因為由兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端是相同的．
（2）過程③將重組質粒導入豬胎兒成纖維細胞時，采用最多的方法是顯微注射技術．
（3）獲得轉基因豬的關鍵步驟是②（填序號），GFP基因的作用是作為標記基因．抑制小豬抗原表達的基因要插入到啟動子和終止子之間．獲得的轉基因克隆豬，可以解決的醫(yī)學難題是可以避免器官移植時發(fā)生免疫排斥反應．
（4）目前科學家們通過蛋白質工程制造出了藍色熒光蛋白，黃色熒光蛋白等，采用蛋白質工程技術制造出藍色熒光蛋白過程的正確順序是：②①③④（用數(shù)字表示）．
①推測藍色熒光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸   ②藍色熒光蛋白的功能分析和結構設計序列
③藍色熒光蛋白基因的修飾（合成）              ④表達出藍色熒光蛋白．

Answer 1

分析 根據題意和圖示分析可知：圖示表示綠色熒光蛋白轉基因克隆豬的培育過程，其中①表示目的基因的獲��；②為基因表達載體的構建過程；③是將目的基因導入受體細胞的過程．之后還采用了核移植技術、早期胚胎培養(yǎng)技術和胚胎移植技術．

解答 解：（1）限制性內切酶Ⅰ的識別序列和切點是-G^↓GATCC-，限制性內切酶Ⅱ的識別序列和切點是-^↓GATC-，可見這兩種限制酶切割后形成的黏性末端相同，因此能在DNA連接酶的作用下連接起來．
（2）將重組質粒導入動物細胞的方法是顯微注射法．
（3）獲得轉基因豬的關鍵步驟是②，構建基因表達載體．GFP基因的作用是作為標記基因．抑制小豬抗原表達的基因要插入到啟動子和終止子之間．獲得的轉基因克隆豬，可以解決的醫(yī)學難題是可以避免器官移植時發(fā)生免疫排斥反應．
（4）蛋白質工程的基本途徑：從預期的蛋白質功能出發(fā)，設計預期的蛋白質結構，推測應有的氨基酸序列，找到相對應的脫氧核苷酸序列（基因）以上是蛋白質工程特有的途徑；以下按照基因工程的一般步驟進行．因此，采用蛋白質工程技術制造出藍色熒光蛋白過程的正確順序是：②藍色熒光蛋白的功能分析和結構設計序列；①推測藍色熒光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸；③藍色熒光蛋白基因的修飾（合成）；④表達出藍色熒光蛋白．
故答案為：
（1）可以連接 因為由兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端是相同的
（2）顯微注射技術
（3）②標記基因 終止子 器官移植時發(fā)生免疫排斥反應
（4）②①③④

點評 本題結合綠色熒光蛋白轉基因克隆豬的培育過程圖，考查基因工程、蛋白質工程、動物細胞工程和胚胎工程的相關知識，要求考生識記基因工程的工具及操作步驟，能準確判斷圖中各過程的名稱；識記蛋白質工程的基本途徑；識記動物細胞核移植技術和胚胎工程技術的相關應用，能結合題圖答題．