Question

18．培育轉(zhuǎn)基因奶牛生產(chǎn)人血清白蛋白的主要步驟如下：
（1）提取目的基因：人血清白蛋白基因可以從基因文庫中提取，含有人所有基因的文庫稱為基因組文庫，獲得人血清白蛋白基因后可利用PCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增．
（2）構(gòu)建基因表達(dá)栽體：構(gòu)建人血清白蛋白基因表達(dá)栽體時，質(zhì)粒和目的基因分別用限制酶和DNA連接酶處理后，其重組類型有三種，可根據(jù)重組DNA分子的堿基排列次序或分子量不同，篩選出含目的基因的重組質(zhì)粒．
（3）把目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：利用顯微注射技術(shù)將基因表達(dá)載體導(dǎo)入牛的受精卵并進(jìn)行早期培養(yǎng)．
（4）早期胚胎培養(yǎng)和胚胎移植：早期胚胎培養(yǎng)到桑椹胚或囊胚時，可通過胚胎分割技術(shù)增加胚胎的數(shù)量，移植前需要取胚胎的滋養(yǎng)層細(xì)胞進(jìn)行性別鑒定，移植后需要對受體母牛進(jìn)行妊娠檢査．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物�?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）基因文庫包括基因組文庫和部分基因文庫，其中基因組文庫含有某種生物全部的基因，部分基因文庫只含有該生物部分基因．因此，含有人所有基因的文庫稱為基因組文庫．PCR技術(shù)可在體外大量擴(kuò)增目的基因．
（2）構(gòu)建基因表達(dá)栽體時，首先要用限制酶切割含有目的基因的外源DNA和運(yùn)載體（如質(zhì)粒），其次需要用DNA連接酶將目的基因與運(yùn)載體連接形成重組DNA分子．若只考慮兩兩解，重組類型有三種，可根據(jù)重組DNA分子的堿基排列次序或分子量不同，篩選出含目的基因的重組質(zhì)粒．
（3）將目的基因?qū)�入動物�?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；培育轉(zhuǎn)基因動物時，應(yīng)該以受精卵作為受體細(xì)胞，因為受精卵的全能性最高，且具有促進(jìn)全能性表達(dá)的物質(zhì)．
（4）要增加胚胎的數(shù)量，可采用胚胎分割技術(shù)；進(jìn)行性別鑒定時，可挑取囊胚期的滋養(yǎng)層細(xì)胞進(jìn)行性別鑒定．
故答案為：
（1）基因組文庫    PCR
（2）限制酶和DNA連接酶    堿基排列次序或分子量
（3）顯微注射    受精卵
（4）胚胎分割    滋養(yǎng)層

點(diǎn)評 本題考查基因工程和胚胎工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)；識記胚胎分割的特點(diǎn)及注意事項，能結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確答題，屬于考綱識記和理解層次的考查．