Question

19．利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)羧酸酯酶（CarE）制劑的流程如下圖所示，請(qǐng)根據(jù)圖示過(guò)程和所學(xué)知識(shí)回答下列問(wèn)題：

（1）過(guò)程①需要使用逆轉(zhuǎn)錄酶，過(guò)程②需要使用限制性核酸內(nèi)切酶，然后通過(guò)PCR技術(shù)獲得大量的目的基因．
（2）圖中的表達(dá)載體一般要有一至多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)便于目的基因的插入．在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)要用到工具酶，常用的DNA連接酶有E•coliDNA連接酶和T₄DNA連接酶，后者可以用于平末端的連接．
（3）基因表達(dá)載體由目的基因、啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因和復(fù)制原點(diǎn)等組件組成，其中啟動(dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA．
（4）過(guò)程③使用的感受態(tài)細(xì)胞是用Ca²⁺（CaCl₂溶液）處理制備的，過(guò)程④可用DNA分子雜交技術(shù)鑒定目的基因是否導(dǎo)入了受體細(xì)胞．
（5）蛋白質(zhì)工程中對(duì)蛋白質(zhì)分子進(jìn)行改造，本質(zhì)是改變其基因結(jié)構(gòu)，所以說(shuō)蛋白質(zhì)工程是在基因工程基礎(chǔ)上延伸出來(lái)的第二代基因工程，它不同于基因工程的結(jié)果是能生產(chǎn)自然界沒(méi)有的蛋白質(zhì)．

Answer 1

分析 分析圖解：圖中過(guò)程①表示利用mRNA通過(guò)反轉(zhuǎn)錄法合成相應(yīng)的DNA；過(guò)程②表示利用PCR技術(shù)對(duì)目的基因進(jìn)行擴(kuò)增；過(guò)程③表示將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞；過(guò)程④表示通過(guò)篩選獲得工程菌．

解答 解：（1）過(guò)程①表示利用mRNA通過(guò)反轉(zhuǎn)錄法合成目的基因，逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程中需要逆轉(zhuǎn)錄酶的催化，然后通過(guò)PCR技術(shù)獲得大量的目的基因．
（2）基因表達(dá)載體一般要有一至多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)，以便于目的基因的插入．在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)要用到工具酶有限制性?xún)?nèi)切酶和DNA連接酶，常用的DNA連接酶有E•coliDNA連接酶和 T₄DNA連接酶，后者可以用于平末端的連接．
（3）基因表達(dá)載體由目的基因、啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因和復(fù)制原點(diǎn)等組件組成，其中啟動(dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA．
（4）將目的基因?qū)�入微生物常用感受態(tài)細(xì)胞法，即用Ca²⁺（CaCl₂溶液）處理制備的，鑒定目的基因是否導(dǎo)入了受體細(xì)胞可用DNA分子雜交技術(shù)．
（5）蛋白質(zhì)工程的本質(zhì)是基因工程，是改變其基因結(jié)構(gòu)，所以說(shuō)蛋白質(zhì)工程是在基因工程基礎(chǔ)上延伸出來(lái)的第二代基因工程，它不同于基因工程的結(jié)果是能生產(chǎn)自然界沒(méi)有的蛋白質(zhì)．
故答案為：
（1）逆轉(zhuǎn)錄　　　限制性核酸內(nèi)切　　　PCR
（2）目的基因的插入　　　　E•coliDNA連接酶    T₄DNA連接酶
（3）啟動(dòng)子　　終止子　　標(biāo)記基因　　　啟動(dòng)子　　　基因轉(zhuǎn)錄出mRNA
（4）Ca²⁺（CaCl₂溶液）　　DNA分子雜交
（5）基因　　　　能生產(chǎn)自然界沒(méi)有的蛋白質(zhì)

點(diǎn)評(píng) 本題考查了基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生能夠識(shí)記基因工程的操作步驟，通過(guò)操作步驟確定圖中各標(biāo)號(hào)表示的生理過(guò)程；識(shí)記PCR技術(shù)中不需要解旋酶；識(shí)記目的基因?qū)�入微生物的方法等，難度不大，屬于考綱中識(shí)記、理解層次的考查．