Question

【題目】內皮素（ET）是一種含21個氨基酸的多肽．內皮素主要通過與靶細胞膜上的內皮素受體結合而發(fā)揮生物學效應．ETA是內皮素的主要受體，科研人員試圖通過構建表達載體，實現(xiàn)ETA基因在細胞中高效表達，為后期ETA的體外研究奠定基礎．其過程如圖（圖中SNAP基因是一種熒光蛋白基因，限制酶ApaⅠ的識別序列為C↓CCGGG，限制酶XhoⅠ的識別序列為C↓TCGAG）．請分析回答：

（1）完成過程①需要的酶是；該酶催化的底物是；
（2）過程③中，限制酶XhoⅠ切割DNA，使鍵斷開，形成的黏性末端是 ． 用兩種限制酶切割，獲得不同的黏性末端，其主要目的是 ．
（3）過程④中需要酶，去構建重組質粒．過程⑥中，要用預先處理大腸桿菌，使其處于容易吸收外界DNA的 ．
（4）利用SNAP基因與ETA基因結合構成融合基因，目的是 ．
（5）人皮膚黑色素細胞上有內皮素的特異受體，內皮素與黑色素細胞膜上的受體結合后，會刺激黑色素細胞的分化、增殖并激活酪氨酸酶的活性，從而使黑色素急劇增加．美容時可以利用注射ETA達到美白祛斑效果，試解釋原因：抑制了內皮素對黑色素細胞的增殖和黑色素的形成．

Answer 1

【答案】
（1）逆轉錄酶,脫氧核苷酸
（2）磷酸二酯,,防止質粒自身環(huán)化
（3）DNA連接,Ca2+,感受態(tài)
（4）檢測ETA基因能否表達
（5）ETA能與內皮素結合,減少了內皮素與黑色素細胞膜上內皮素受體的結合
【解析】解：（1）圖中①是逆轉錄過程，需要逆轉錄酶的催化；該酶催化的底物是脫氧核苷酸．（2）③是利用限制酶XhoⅠ切割DNA獲得目的基因的過程，由于限制酶XhoⅠ的識別序列為C↓TCGAG，因此其切割形成的黏性末端是 ．圖中顯示利用了兩種限制酶切割目的基因和載體，從而獲得了不同的黏性末端，這樣可以防止目的基因與運載體反向連接，防止質粒自身環(huán)化，即可以使目的基因定向連接到載體上．（3）過程④中需要DNA連接酶去構建重組質粒．將目的基因導入微生物細胞常用感受態(tài)轉化法，即用Ca2+（或CaCl2）預先處理大腸桿菌，使其處于容易吸收外界DNA的感受態(tài)．（4）利用SNAP基因與ETA基因結合構成融合基因，可以檢測ETA基因能否表達及表達量．（5）ETA能與內皮素結合，減少了內皮素與黑色素細胞膜上內皮素受體的結合，抑制了內皮素對黑色素細胞的增值和黑色素的形成，從而達到美容的目的．

所以答案是：（1）逆轉錄酶 ；脫氧核苷酸 ；（2）磷酸二酯 ； ； 防止質粒自身環(huán)化（或使目的基因定向連接到載體上）；（3）DNA連接 ； Ca2+（或CaCl2） ； 感受態(tài)；（4）檢測ETA基因能否表達（及其表達量）；（5）ETA能與內皮素結合，減少了內皮素與黑色素細胞膜上內皮素受體的結合.
【考點精析】解答此題的關鍵在于理解基因工程的原理及技術的相關知識，掌握基因工程的原理是利用DNA重組技術．