Question

2．如圖是口蹄疫疫苗生產(chǎn)過程示意圖，請據(jù)圖回答下列問題：

（1）首先從口蹄疫病毒中提取部分合成病毒蛋白的RNA，而不是用口蹄疫病毒的全部RNA，原因是合成病毒蛋白的RNA控制合成的病毒蛋白質(zhì)，具有抗原特性，又不會使動物致�。�以合成病毒蛋白的RNA產(chǎn)生病毒蛋白的DNA，需用到的工具酶是逆轉(zhuǎn)錄酶．
（2）構(gòu)建基因表達載體所需要的工具酶是限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶．基因表達載體除目的基因外，還應(yīng)包括啟動子、終止子、標記基因．
（3）導(dǎo)入大腸桿菌前需先將大腸桿菌處理為感受態(tài)細胞．
（4）為檢測目的基因是否導(dǎo)入受體細胞，常常要借助載體上標記基因的表達，更準確的方法是利用放射性同位素標記的病毒蛋白基因（目的基因）作探針與基因組DNA雜交．最后還要檢測目的基因是否翻譯成了病毒蛋白質(zhì)，利用的技術(shù)是抗原-抗體雜交技術(shù)．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成．
（2）基因表達載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物細胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）首先從口蹄疫病毒中提取部分合成病毒蛋白的RNA，而不是用口蹄疫病毒的全部RNA，原因是合成病毒蛋白的RNA控制合成的病毒蛋白質(zhì)，具有抗原特性，又不會使動物致�。�以RNA為模板合成DNA的過程為逆轉(zhuǎn)錄過程，需要逆轉(zhuǎn)錄酶的催化．
（2）構(gòu)建基因表達載體時，首先需要用同種限制酶切割含有目的基因的外源DNA和運載體，其次需要用DNA連接酶將目的基因與運載體連接形成重組DNA．基因表達載體的組成包括目的基因、啟動子、終止子、標記基因．
（3）將目的基因?qū)�入微生物細胞常用感受態(tài)轉(zhuǎn)化法，即用用Ca²⁺處理大腸桿菌細胞，使之成為易于吸收周圍環(huán)境中DNA分子的感受態(tài)細胞．
（4）標記基因的作用是檢測目的基因是否導(dǎo)入受體細胞；檢測目的基因是否導(dǎo)入受體細胞還可以采用DNA分子雜交技術(shù)，即用放射性同位素標記的病毒蛋白基因 （目的基因） 作探針與基因組DNA雜交；檢測目的基因是否翻譯成了病毒蛋白質(zhì)需用抗原-抗體雜交技術(shù)．
故答案為：
（1）抗原　 逆轉(zhuǎn)錄酶
（2）限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶   　啟動子、終止子、標記基因
（3）感受態(tài)
（4）標記基因   　病毒蛋白基因 （目的基因）   抗原-抗體雜交技術(shù)

點評 本題考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的原理、操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節(jié)，能結(jié)合圖中信息準確答題．