Question

【題目】華蟾素是我國經典抗腫瘤藥物。研究人員為探尋華蟾素注射液抗肝癌細胞的作用機理，進行了一系列實驗。請根據(jù)圖中信息回答下列問題。

Ⅰ.肝癌細胞的培養(yǎng)

（1）培養(yǎng)肝癌細胞時，在培養(yǎng)基中加入適量的___________以補充合成培養(yǎng)基中缺乏的物質，為防止培養(yǎng)過程發(fā)生污染要加入___________。此外，每48h更換1次培養(yǎng)液，目的是___________；同時還要提供適宜的溫度、___________、氧氣和二氧化碳等環(huán)境條件。

Ⅱ.探究華蟾素藥效作用機理的實驗：

（2）DNA拓撲異構酶Ⅱ（簡稱TopoⅡ）為真核生物所必需，在DNA復制、轉錄等方面發(fā)揮重要作用，TopoⅡ在腫瘤細胞中含量明顯高于正常細胞。華蟾素注射液處理細胞48h后，采用逆轉錄-聚合酶鏈式反應技術檢測TopoⅡ基因的表達情況，結果如表。

華蟾素濃度（μg/ml）	0	0.105	0.21	0.42
TopoⅡ基因表達量	+++++	++++	++	+

①逆轉錄-聚合酶鏈反應的主要原理是：提取肝癌細胞中的總RNA，在___________酶的作用下合成cDNA，再以cDNA為模板進行PCR擴增，為完成該反應還需要添加______________________________________。

②由上可知，華蟾素注射液在分子水平上影響肝癌細胞的機理是_______________________________。

Answer 1

【答案】 血清（血漿） 抗生素 防止代謝物積累對細胞自身造成危害 pH 逆轉錄 引物、耐高溫的DNA聚合酶（Taq酶）和四種脫氧核苷酸 抑制TopoⅡ基因的轉錄，最終導致TopoⅡ含量降低

【解析】試題分析：分析表中結果可知，隨著華蟾素注射液濃度的增加，TopoⅡ基因表達量減少，再結合題干信息“DNA拓撲異構酶Ⅱ在DNA復制、轉錄等方面發(fā)揮重要作用，且它在腫瘤細胞中含量明顯高于正常細胞”分析，華蟾素注射液可能的作用機理是抑制TopoⅡ基因轉錄，導致TopoⅡ含量降低。

（1）在動物細胞培養(yǎng)時，所需的營養(yǎng)物質有糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素等，將這些物質按其類別和所需的數(shù)量嚴格配制而成的培養(yǎng)基，成為合成培養(yǎng)基。由于人們對細胞所需的營養(yǎng)物質還沒有完全搞清楚，因此，在使用合成培養(yǎng)基時，通常需要加入血清、血漿等一些天然成分；為防止培養(yǎng)過程發(fā)生污染需要在培養(yǎng)基加入抗生素；為了防止代謝物積累對細胞自身造成危害，還要定時更換培養(yǎng)液；同時還要提供適宜的溫度、PH、氧氣和二氧化碳等環(huán)境條件。

（2）①逆轉錄需要以提取的mRNA為模板，以游離的脫氧核苷酸為原料，在逆轉錄酶的催化下合成cDNA片段。進行PCR擴增技術需要準備四類物質條件：模板（cDNA）、原料（四種脫氧核苷酸），引物和Taq酶。②由表中實驗結果可知，華蟾素注射液在分子水平上影響肝癌細胞的機理是抑制TopoⅡ基因的轉錄，最終導致TopoⅡ含量降低。