Question

【題目】嗜熱土壤芽胞桿菌產(chǎn)生的P-葡萄糖苷酶（BglB)是一種耐熱纖維素酶，為使其大量生產(chǎn)，科學(xué)家打算利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)使大腸桿菌表達(dá)BglB酶，開展了以下試驗(yàn)：

注：圖中限制酶的識(shí)別序列及切割形成的黏性末端均不相同

(1) 根據(jù)所學(xué)細(xì)胞學(xué)有關(guān)知識(shí)，利用大腸桿菌 (能、不能）生產(chǎn)人的糖蛋白，你作出判斷的理由是 。

(2) 大腸桿菌經(jīng)常作為基因工程的受體細(xì)胞，其優(yōu)點(diǎn)是 。

(3) PCR擴(kuò)增時(shí)，可以從 的基因組文庫(kù)中獲取bglB基因作為模板。

(4) 如圖為所選質(zhì)粒的酶切圖譜，bglB基因兩端不含圖中限制酶的識(shí)別序列，為使bglB基因能重組進(jìn)該質(zhì)粒并構(gòu)建表達(dá)載體，擴(kuò)增的bglB基因兩端應(yīng)當(dāng)加上 酶或 酶的識(shí)別序列。

(5) 若某種限制酶切割形成的DNA片段如下，則可以選擇 進(jìn)行連接，連接后可形成的DNA片段為 (寫出兩種）。

…AC GC… …GC GT…

…TG CG… …CG CA…

Answer 1

【答案】（1)不能（1分） 原核細(xì)胞沒有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體，不能對(duì)糖蛋白進(jìn)行加工 (2) 繁殖快、遺傳物質(zhì)少、單細(xì)胞 (3) 嗜熱土壤芽胞桿菌 (4) NdeI BamHI (5) T4DNA連接酶 （寫出兩種，合理即可）

…ACGC… 或 …ACGT… 或…GCGC… 或 …GCGT…

…TGCG… …TGCA… …CGCG… …CGCA…

【解析】（1）大腸桿菌是原核生物，細(xì)胞內(nèi)沒有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體等細(xì)胞器，所以利用大腸桿菌不能產(chǎn)生糖蛋白這樣的分泌蛋白。（2）基因工程中常常選用大腸桿菌作為的受體細(xì)胞，其優(yōu)點(diǎn)是單細(xì)胞生物，繁殖快、遺傳物質(zhì)少。（3）根據(jù)題意可知，嗜熱土壤芽胞桿菌產(chǎn)生的β-葡萄糖苷酶（BglB），因此PCR擴(kuò)增bglB基因時(shí)，選用嗜熱土壤芽孢桿菌基因組DNA作模板。（4）根據(jù)啟動(dòng)子和終止子的生理作用可知，目的基因應(yīng)導(dǎo)入啟動(dòng)子和終止子之間．圖中看出，兩者之間存在三種限制酶切點(diǎn)，但是由于Xbal在質(zhì)粒上不止一個(gè)酶切位點(diǎn)，因此為使PCR擴(kuò)增的bglB基因重組進(jìn)該質(zhì)粒，擴(kuò)增的bglB基因兩端需分別引入NdeⅠ和BamHⅠ不同限制酶的識(shí)別序列。（5）能將平末端的DNA片段連接起來的連接酶只有T4DNA連接酶。結(jié)合圖示，連接后可形成的DNA片段為…ACGC… 或 …ACGT… 或…GCGC… 或 …GCGT…

…TGCG… …TGCA… …CGCG… …CGCA…