Question

【題目】酶切圖譜是描述限制性內(nèi)切酶的酶切點(diǎn)的位置和距離信息的圖譜，通常選取某一特定長(zhǎng)度的DNA分子，用多種限制酶單獨(dú)或聯(lián)合切割，再通過(guò)電泳技術(shù)將酶切片段進(jìn)行分離，計(jì)算相對(duì)大小，從而確定每一種限制酶在DNA分子中的切點(diǎn)位置和相對(duì)距離。下圖表示BamHⅠ、BstⅠ、BglⅡ三種限制酶識(shí)別的核苷酸序列和切割位點(diǎn)，表格中數(shù)據(jù)是用限制酶EcoR Ⅴ、Mbo Ⅰ單獨(dú)或聯(lián)合切割同一種質(zhì)粒，得到DNA片段長(zhǎng)度。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

BamH Ⅰ ―→＋ Bst Ⅰ ―→＋

Bgl Ⅱ ―→＋

酶	DNA片段長(zhǎng)度
EcoRⅤ	14 kb
MboⅠ	2.5 kb、11.5 kb
EcoRⅤ＋MboⅠ	2.5 kb、5.5 kb、6 kb

(1)限制性內(nèi)切酶BamHⅠ與BstⅠ作用的特點(diǎn)是________________，BamHⅠ與BglⅡ作用的特點(diǎn)是________________。黏性末端＋重組的DNA分子________(填“能”或“不能”)被BglⅡ識(shí)別。

(2)請(qǐng)?jiān)趫D中畫(huà)出質(zhì)粒上EcoRⅤ、MboⅠ的切割位點(diǎn)。

(3)DNA連接酶與DNA聚合酶作用的共同點(diǎn)是都形成________鍵，不同點(diǎn)是____________________________。

(4)在基因工程中，檢測(cè)受體細(xì)胞是否含有目的基因采用的方法是________________。

Answer 1

【答案】（1）識(shí)別相同的核苷酸序列，而且切點(diǎn)相同 識(shí)別的核苷酸序列不同，產(chǎn)生相同的黏性末端 不能

(2)見(jiàn)下圖

（3）磷酸二酯 DNA連接酶連接DNA片段之間的磷酸二酯鍵，DNA聚合酶連接DNA片段與單個(gè)脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵

(4)DNA分子雜交技術(shù)

【解析】

試題分析：（1）限制酶BamHⅠ與BstⅠ能識(shí)別相同的核苷酸序列，而且切點(diǎn)相同；BamHI與BglⅡ識(shí)別的核苷酸序列不同，但能產(chǎn)生相同的黏性末端作。黏性末端重組的DNA序列為GGATCC∥CCTAGG，而限制酶BglⅡ的識(shí)別序列為AGATCT∥TCTAGA，根據(jù)酶的專一性原理可知，重組DNA分子不能被BglⅡ識(shí)別。

（2）用限制酶EcoRV單獨(dú)切割時(shí)，只能形成一種長(zhǎng)度為14kb的DNA片段，說(shuō)明該質(zhì)粒上只有一個(gè)EcoRV酶切位點(diǎn)；用限制酶MboⅠ單獨(dú)切割時(shí)，能形成兩種長(zhǎng)度分別為2.5 kb、11.5 kb的DNA片段，說(shuō)明該質(zhì)粒上有2個(gè)MboⅠ酶切位點(diǎn)；用限制酶EcoRV、MboⅠ同時(shí)切割時(shí)，能形成三種長(zhǎng)度分別為2.5 kb、5.5 kb、6 kb的DNA片段，說(shuō)明11.5kb的DNA片段被切割成兩段，即11.5kb的DNA該片段上有一個(gè)EcoRV酶切位點(diǎn)，因此質(zhì)粒上EcoRV、MboⅠ的切割位點(diǎn)圖如答案所示。

（3）DNA連接酶與DNA聚合酶作用的共同點(diǎn)都形成是磷酸二酯鍵，不同點(diǎn)是DNA連接酶連接DNA片段之間的磷酸二酯鍵，DNA聚合酶連接DNA片段與單個(gè)脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵。

（4）檢測(cè)受體細(xì)胞是否含有目的基因常用DNA分子雜交技術(shù)。