Question

14．某研究小組從牛的瘤胃中采集樣本，進行分解尿素的微生物的分離與計數(shù)．實驗基本步驟如下：

（1）分解尿素的微生物含有脲酶（分解尿素的酶），因此，配制培養(yǎng)基時以尿素作為唯一氮源，尿素會被分解成氨（NH₃）使培養(yǎng)基的堿性增強．
（2）配制培養(yǎng)基時，需添加瓊脂，瓊脂起凝固劑作用；培養(yǎng)基中添加酚紅作為指示劑，可使目標菌落的周圍產(chǎn)生紅色環(huán)帶．
（3）對尿素溶液進行滅菌的最適方法是D滅菌．
A．高壓蒸汽 B．干熱 C．添加抗生素 D．過濾 E．紫外線照射 F.70%酒精浸泡
（4）該小組在接種前，隨機取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)了一段時間，這樣做的目的是檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格；然后將1mL瘤胃樣液稀釋1000倍，在3個平板上用涂布法分別接入0.1mL稀釋液；經(jīng)適當培養(yǎng)后，3個平板的菌落數(shù)分別為49、47和45．據(jù)此可得出每升瘤胃樣液中分解尿素的微生物活菌數(shù)為4.7×10⁸，理論上，統(tǒng)計的菌落數(shù)往往低（低、等、高）于接種的實際活菌數(shù)目．

Answer 1

分析 1、接種最常用的方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法．接種的目的是使聚集在一起的微生物分散成單個細胞．微生物的營養(yǎng)物質(zhì)有5類，分別是水、無機鹽、碳源、氮源及生長因子．
2、由于細菌分解在尿素的過程中合成脲酶，脲酶將尿素分解成氨，會使培養(yǎng)基堿性增強，PH升高，所以可以用檢測pH的變化的方法來判斷尿素是否被分解，可在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，尿素被分解后產(chǎn)生氨，PH升高，指示劑變紅．
3、實驗室常用的滅菌方法：
①灼燒滅菌：將微生物的接種工具，如接種環(huán)、接種針或其他金屬工具，直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒，可以迅速徹底地滅菌，此外，在接種過程中，試管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通過火焰燃燒來滅菌；
②干熱滅菌：能耐高溫的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培養(yǎng)皿）和金屬用具等，可以采用這種方法滅菌；
③高壓蒸汽滅菌：將滅菌物品放置在盛有適量水的高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，為達到良好的滅菌效果，一般在壓力為100 kPa，溫度為121℃的條件下，維持15～30 min．

解答 解：（1）分解尿素的微生物含有脲酶（分解尿素的酶），因此，配制培養(yǎng)基時以尿素作為唯一氮源，尿素會被分解成氨（NH₃）使培養(yǎng)基的堿性增強．
（2）配制培養(yǎng)基時，需添加瓊脂，瓊脂起凝固劑作用；培養(yǎng)基中添加酚紅作為指示劑，可使目標菌落的周圍產(chǎn)生紅色環(huán)帶．
（3）由于尿素在高溫下會分解，所以對尿素溶液的滅菌要采用G6玻璃漏斗過濾的方法．
（4）該小組在接種前，隨機取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)了一段時間，這樣做的目的是檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格；然后將1mL瘤胃樣液稀釋1000倍，在3個平板上用涂布法分別接入0.1mL稀釋液；經(jīng)適當培養(yǎng)后，3個平板的菌落數(shù)分別為49、47和45．因此據(jù)此可得出每升瘤胃樣液中分解尿素的（1L=1000mL）中的活菌數(shù)=$\frac{49+47+45}{3}$×1000×10×1000=4.7×10⁸．由于每個菌落可能是一個或多個活菌增殖而來，統(tǒng)計的菌落數(shù)往往低于接種的實際活菌數(shù)目．
故答案為：
（1）脲酶（分解尿素的酶）      氨（NH₃）
（2）凝固劑      酚紅
（3）D
（4）檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格     4.7×10⁸       低

點評 本題主要考查微生物的培養(yǎng)、分解尿素的細菌的鑒定等知識點，明確相關(guān)的知識點，正確的解答相關(guān)的試題．