Question

【題目】請(qǐng)回答以下有關(guān)基因工程的問(wèn)題：

（1）基因工程中切割DNA的工具酶是______________。DNA連接酶根據(jù)其來(lái)源不同，分為__________和___________。

（2）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成_______。該過(guò)程中需要的酶是___________。

（3）將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞采用最多的方法是_______________，依據(jù)該法的侵染特點(diǎn)，目的基因?qū)⒉迦氲?/span>Ti質(zhì)粒的_______上，經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)化作用，進(jìn)入植物細(xì)胞，并將其插入到____________，從而使其得以維持穩(wěn)定和表達(dá)。

Answer 1

【答案】限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）??? E·coli DNA連接酶??? T4DNA連接酶??? 引物??? 耐高溫的DNA聚合酶（Taq酶）??? 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法??? T-DNA??? 植物細(xì)胞染色體的DNA上???

【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。

（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。

（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。

（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)，個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（1）基因工程中切割DNA的工具酶是限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）。DNA連接酶根據(jù)其來(lái)源于大腸桿菌或T4噬菌體，分為E·coli DNA連接酶和T4DNA連接酶。

（2）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因需要一段已知目的基因的核苷酸序列，即引物，PCR技術(shù)中有高溫解旋的步驟，因此需要耐高溫的DNA聚合酶（Taq酶）。

（3）將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞采用最多的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，這種方法是利用農(nóng)桿菌能侵染雙子葉植物的特點(diǎn)，將目的基因插入到Ti質(zhì)粒的T-DNA上，經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)化作用，進(jìn)入植物細(xì)胞，并將其插入到植物細(xì)胞染色體的DNA上，從而使其得以維持穩(wěn)定和表達(dá)。