Question

【題目】我國(guó)肝損傷病的發(fā)生率較高。據(jù)研究，不同濃度的胰島素對(duì)減緩肝細(xì)胞損傷有保護(hù)作用，且胰島素濃度越高保護(hù)作用越強(qiáng)。LPS是一種導(dǎo)致肝損傷的常見物質(zhì)（用生理鹽水配制）�，F(xiàn)欲以大鼠為材料驗(yàn)證上述結(jié)論，回答下列問題：

（1）材料制備：

①肝細(xì)胞懸液的制備：取某健康幼年大鼠的肝臟，適宜條件下取出剪碎再用______________酶消化，經(jīng)多次洗滌離心處理得到分散的肝細(xì)胞，加入適宜的細(xì)胞培養(yǎng)液置于卡氏瓶和CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行______________培養(yǎng)，將培養(yǎng)得到的肝細(xì)胞懸液隨機(jī)分為5組，編號(hào)為A—E，每組均需再____________________________，置于相同且適宜的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)備用。

②胰島素溶液：用生理鹽水配制低、中、高三種濃度的胰島素溶液，分別加入到C、D、E組的肝細(xì)胞懸液中。

（2）實(shí)驗(yàn)方案及結(jié)果預(yù)期：

①A組作為空白對(duì)照組，則往B、C、D、E組還需加入等量的______________。

②若本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果用細(xì)胞存活率作為檢測(cè)指標(biāo)，各組的存活細(xì)胞數(shù)先用_________測(cè)出OD值，然后計(jì)算各組的細(xì)胞存活率。細(xì)胞存活率＝該組OD值／A組OD值×100％，不考慮細(xì)胞死亡對(duì)OD值的影響。

③用柱形圖表示各組的實(shí)驗(yàn)結(jié)果_____。

（3）實(shí)驗(yàn)從細(xì)胞水平分析推測(cè)胰島素對(duì)減緩肝細(xì)胞損傷的機(jī)理可能有______________（至少寫出二點(diǎn)）。

Answer 1

【答案】胰蛋白 原代 設(shè)多個(gè)重復(fù)樣液 LPS 比色計(jì)（或比濁計(jì)、分光光度計(jì)） 促進(jìn)細(xì)胞分裂 延緩細(xì)胞凋亡

【解析】

分析題文描述可知：該實(shí)驗(yàn)的目的是驗(yàn)證不同濃度的胰島素對(duì)減緩肝細(xì)胞損傷有保護(hù)作用，且胰島素濃度越高保護(hù)作用越強(qiáng)，自變量為不同濃度的胰島素，因變量是肝細(xì)胞的損傷程度，可以用細(xì)胞的存活率來表示。為了使實(shí)驗(yàn)更具有科學(xué)性，需要設(shè)置空白對(duì)照組和不加胰島素且經(jīng)LPS作用后的對(duì)照組。據(jù)此結(jié)合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)要遵循的對(duì)照原則、等量性原則、重復(fù)原則等分析解答相關(guān)問題。

(1)材料制備：依據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康�、�?shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的原則，首先應(yīng)借助動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)過程制備肝細(xì)胞懸液并分組編號(hào)，其操作過程為：取某健康幼年大鼠的肝臟，適宜條件下取出剪碎再用胰蛋白酶消化，經(jīng)多次洗滌離心處理得到分散的肝細(xì)胞，加入適宜的細(xì)胞培養(yǎng)液置于卡氏瓶和CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行原代培養(yǎng)，將培養(yǎng)得到的肝細(xì)胞懸液隨機(jī)分為5組，編號(hào)為A—E，每組均需再設(shè)置多個(gè)重復(fù)樣液，置于相同且適宜的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)備用。

(2 )實(shí)驗(yàn)方案及結(jié)果預(yù)期：

①依據(jù)題文描述可知，若A組作為空白對(duì)照組，則A組應(yīng)為正常的肝細(xì)胞，而B、C、D、E組應(yīng)為受到損傷的肝細(xì)胞，所以需要往B、C、 D、E組加入等量的LPS。

②若本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果用細(xì)胞存活率作為檢測(cè)指標(biāo)，依據(jù)計(jì)算公式“細(xì)胞存活率＝該組OD值／A組OD值×100％”可知：需要先用比色計(jì)測(cè)出各組的OD值。

③因該實(shí)驗(yàn)是驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)，其結(jié)論是已知的，即不同濃度的胰島素對(duì)減緩肝細(xì)胞損傷有保護(hù)作用，且胰島素濃度越高保護(hù)作用越強(qiáng)，所以實(shí)驗(yàn)結(jié)果檢測(cè)的各組細(xì)胞存活率由大到小依次是A組＞E組＞D組＞C組＞B組。反映各組實(shí)驗(yàn)結(jié)果的柱形圖見答案。

(3)從細(xì)胞水平分析推測(cè)：胰島素可能通過延緩細(xì)胞分裂、延緩細(xì)胞凋亡等來減緩肝細(xì)胞損傷。