Question

【題目】番茄病毒病可以造成植株長勢衰退、產(chǎn)量降低。“卡特琳娜”是從荷蘭引進的番茄新品種，而在我國推廣種植過程中，該品種普遍表現(xiàn)為植株矮化、頂部葉片常出現(xiàn)稍褪綠發(fā)黃等病毒病癥狀，嚴重影響果實產(chǎn)量和品質(zhì)。探明“卡特琳娜”番茄病毒病的主要致病病毒，對培育脫毒苗至關(guān)重要。請回答下列相關(guān)問題：

（1）對“卡特琳娜”番茄植株進行致病病毒檢測可采用RT-PCR技術(shù)，該方法是從番茄植株的組織細胞中提取mRNA，以mRNA為模板在__________酶的作用下合成cDNA，再以其為模板進行PCR擴增，然后與現(xiàn)有病毒核酸進行雜交檢測。若要構(gòu)建“卡特琳娜”番茄的cDNA文庫，具體操作是__________。

（2）利用PCR技術(shù)擴增目的基因所具備的前提是__________序列，以便根據(jù)這一序列合成所需的__________。

（3）“卡特琳娜”番茄病毒病無有效藥劑可以防治，種植脫毒苗木是較有效的防控措施培育脫毒苗常選擇__________作為外植體，原因是____________________。培養(yǎng)該脫毒苗所用的技術(shù)稱為__________。

Answer 1

【答案】逆轉(zhuǎn)錄 取“卡特琳娜”番茄發(fā)育的某個時期的mRNA反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的多種DA片段，與載體連接后儲存在一個受體菌群中，即可得到“卡特琳娜”番茄的cDNA文庫 要有一段已知目的基因的核苷酸 引物 莖尖（或根尖） 莖尖（或根尖）病毒極少，甚至無毒 植物組織培養(yǎng)

【解析】

RT-PCR即逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)。其主要原理是：提取細胞中的總RNA，在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下合成cDNA，再以cDNA為模板進行PCR擴增。PCR擴增過程需要添加引物、耐高溫的DNA聚合酶（Taq酶）和四種脫氧核苷酸。

（1）對“卡特琳娜”番茄進行致病病毒檢測可采用RT一PCR技術(shù)，該方法是從番茄植株的組織細胞中提取mRNA，以mRNA為模板在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下合成cDNA再以cDNA為模板進行PCR擴增，然后與現(xiàn)有病毒核酸進行雜交檢測。若要構(gòu)建“卡特琳娜”番茄的cDNA文庫，具體操作是取“卡特琳娜”番茄發(fā)育的某個時期的mRNA反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的多種cDNA片段，與載體連接后儲存在一個受體菌群中，即可得到“卡特琳娜”番茄的cDNA文庫。

（2）利用PCR技術(shù)擴增目的基因所具備的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成所需的引物。

（3）培育脫毒苗常選擇莖尖（或根尖）作為外植體，原因是這些部位病毒極少甚至無毒。由離體的器官、組織或細胞培育成整個植物體用到的技術(shù)為植物組織培養(yǎng)。