Question

下面是探究如何從土壤中分離自生固氮菌與計(jì)數(shù)的實(shí)驗(yàn)．實(shí)驗(yàn)原理：農(nóng)田的表層土壤中，自生固氮菌的含量比較多．將用表土制成的稀泥漿，接種到無氮培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)．在這種情況下，只有自生固氮菌才能生長(zhǎng)繁殖．用這種方法，可以將自生固氮菌與其他細(xì)菌分離開來．
材料用具：農(nóng)田的表層土壤、無氮培養(yǎng)基、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、盛9mL無菌水的試管、無菌吸管、無菌涂布器、無菌培養(yǎng)皿、盛90mL無菌水的錐形瓶、恒溫箱．
方法步驟：
（1）倒平板．分別將無氮培養(yǎng)基、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基倒平板，應(yīng)在

 

操作．
（2）制備土壤稀釋液．取土樣10g加入盛有90mL無菌水的錐形瓶中，充分搖勻．用無菌吸管吸取上清液lmL，轉(zhuǎn)至9mL的無菌水的大試管中，依次稀釋到10⁷倍稀釋度．
（3）涂布．按照由10¹～10⁸倍稀釋度的順序分別吸取0.1mL進(jìn)行平板涂布，每個(gè)稀釋度下，無氮培養(yǎng)基應(yīng)至少涂布

 

個(gè)子板，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基涂布

 

個(gè)．
（4）培養(yǎng)．放入恒溫箱內(nèi)，在28～30℃下培養(yǎng)3～4d．
（5）細(xì)菌的計(jì)數(shù)．當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)，選取茵落數(shù)在

 

的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)．如果測(cè)試的平均值為50，則每克樣品中的菌落數(shù)是（稀釋度是10⁵倍）

 

．預(yù)期結(jié)果：相同稀釋度下，牛肉膏蛋白胨平板上的菌落數(shù) （填“多于”或“少于”）無氮培養(yǎng)基上的數(shù)目，原因是

 

．

Answer 1

考點(diǎn)：微生物的分離和培養(yǎng)

專題：

分析：1．分離菌株的思路
（1）自然界中目的菌株的篩選
①依據(jù)：根據(jù)它對(duì)生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找．
②實(shí)例：PCR技術(shù)過程中用到的耐高溫的Taq DNA聚合酶，就是從熱泉中篩選出來的Taq細(xì)菌中提取出來的．
（2）實(shí)驗(yàn)室中目的菌株的篩選
①原理：人為提供有利于目的菌株生長(zhǎng)的條件（包括營(yíng)養(yǎng)、溫度．pH等），同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)．
培養(yǎng)基選擇分解尿素的微生物的原理：培養(yǎng)基的氮源為尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源．缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長(zhǎng)發(fā)育繁殖，而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物
②方法：能合成脲酶的細(xì)菌才能分解尿素．配制以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基，能夠生長(zhǎng)的細(xì)菌就是能分解尿素的細(xì)菌
2．統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法
（1）稀釋涂布平板法（間接）
①當(dāng)樣品的稀釋庋足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌．
②通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)來推測(cè)樣品中大約含有的活菌數(shù)．
（2）利用顯微鏡直接計(jì)數(shù)
3．分解尿素的細(xì)菌的鑒定細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成氨，氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)．在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑培養(yǎng)細(xì)菌，若指示劑變紅，可確定該種細(xì)菌能夠分解尿素．
4．實(shí)驗(yàn)流程
土壤取樣→樣品的稀釋→將稀釋液涂布到以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基上→挑選能生長(zhǎng)的菌落→鑒定

解答： 解：（1）倒平板應(yīng)在酒精燈火焰旁進(jìn)行，防止雜菌污染．
（3）按照由10¹～10⁸倍稀釋度的順序分別吸取0.1mL進(jìn)行平板涂布，每個(gè)稀釋度下，無氮培養(yǎng)基應(yīng)至少涂布3個(gè)平板，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基涂布1個(gè)平板做對(duì)照．
（5）當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)，選取茵落數(shù)在30-300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)．如果測(cè)試的平均值為50，則每克樣品中的菌落數(shù)是（稀釋度是10⁵倍）5×10⁷，牛肉膏蛋白胨平板上的菌落數(shù)多于無氮培養(yǎng)基上的數(shù)目，原因是無氮培養(yǎng)基上能生存繁殖的僅是土壤中的固氮菌，而牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上幾乎允許土壤中所有菌類生存．
故答案為：（1）火焰旁  
（3）3  1  
（5）30～300   5×10⁷   多于   無氮培養(yǎng)基上能生存繁殖的僅是土壤中的固氮菌，而牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上幾乎允許土壤中所有菌類生存

點(diǎn)評(píng)：微生物的實(shí)驗(yàn)室分離是高考的熱點(diǎn)，考生需注意掌握教材上的基礎(chǔ)知識(shí)，把握知識(shí)間的內(nèi)在聯(lián)系．