Question

【題目】血紅蛋白是人和其他脊椎動(dòng)物紅細(xì)胞的主要組成成分，負(fù)責(zé)血液中O2或CO2的運(yùn)輸。據(jù)血紅蛋白的提取和分離流程圖回答問題。

（1）將實(shí)驗(yàn)流程補(bǔ)充完整：A為_____，凝膠色譜法是根據(jù)_____來分離蛋白質(zhì)的有效方法。

（2）洗滌紅細(xì)胞的目的是去除_____。洗滌干凈的標(biāo)志是_____。釋放血紅蛋白的過程中起作用的物質(zhì)有_____。

（3）在洗脫過程中加入物質(zhì)的量濃度為20mol/L的磷酸緩沖液（pH為7.0）的目的是_____。

（4）在裝填色譜柱時(shí)不得有氣泡存在，因?yàn)?/span>_____。在凝膠色譜操作過程中，不能發(fā)生洗脫液流干、露出凝膠顆粒的情況，一旦發(fā)生這種情況，需重新裝填凝膠色譜柱。如果紅色區(qū)帶均勻一致地移動(dòng)，說明色譜柱制作成功。

Answer 1

【答案】血紅蛋白的釋放 相對(duì)分子質(zhì)量的大小 雜蛋白（血漿蛋白） 離心后的上清液中沒有黃色 蒸餾水和甲苯 準(zhǔn)確模擬生物體內(nèi)的生理環(huán)境，保持體外的pH和體內(nèi)一致 氣泡會(huì)攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低分離效果

【解析】

1、血紅蛋的提取與分離的實(shí)驗(yàn)步驟主要有(1)樣品處理：紅細(xì)胞的洗滌→血紅蛋白的釋放→分離血紅蛋白溶液→透析；（2）粗分離；（3）純化：凝膠色譜柱的制作→凝膠色譜柱的裝填→樣品的加入和洗脫；（4）純度鑒定——聚丙烯酰胺膠電泳。

2、凝膠色譜法的原理是：分子量大的分子通過多孔凝膠顆粒的間隙，路程短，流動(dòng)快；分子量小的分子穿過多孔凝膠顆粒內(nèi)部，路程長，流動(dòng)慢。所以凝膠色譜法是根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量大小而達(dá)到蛋白質(zhì)分離的有效方法。

3、洗滌紅細(xì)胞的目的是去除雜質(zhì)蛋白，釋放血紅蛋白的過程是讓紅細(xì)胞吸水漲破。如果分層不明顯，可能是洗滌次數(shù)少，無法除去血漿蛋白。此外，離心速度過高和時(shí)間過長，會(huì)使白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞一同沉淀，也得不到純凈的紅細(xì)胞，影響后續(xù)血紅蛋白的提取純度。重復(fù)洗滌三次，直至上清液中沒有黃色，表明紅細(xì)胞已洗滌干凈，因?yàn)榧妆绞潜砻婊钚詣┑囊环N，可將細(xì)胞膜溶解，從而使細(xì)胞破裂。釋放血紅蛋白的過程中起作用的是蒸餾水和甲苯。

4、磷酸緩沖液（PH為7.0)能夠準(zhǔn)確模擬生物體內(nèi)的生理環(huán)境，保持體外的pH和體內(nèi)的一致。如果凝膠色譜柱裝填得很成功、分離操作也正確，能清楚地看到血紅蛋白的紅色區(qū)帶均勻一致地移動(dòng)，隨著洗脫液緩慢流出；如果紅色區(qū)帶歪曲、散亂、變寬,說明分離的效果不好，這與凝膠色譜柱的裝填有關(guān)。

據(jù)分析可知：

（1）將實(shí)驗(yàn)流程補(bǔ)充完整：A為血紅蛋白的釋放，凝膠色譜法是根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的大小來分離蛋白質(zhì)的有效方法。

（2）洗滌紅細(xì)胞的目的是去除雜蛋白（血漿蛋白）。洗滌干凈的標(biāo)志是離心后的上清液中沒有黃色。釋放血紅蛋白的過程中起作用的物質(zhì)有蒸餾水和甲苯。

（3）在洗脫過程中加入物質(zhì)的量濃度為20mol/L的磷酸緩沖液（pH為7.0）的目的是準(zhǔn)確模擬生物體內(nèi)的生理環(huán)境，保持體外的pH和體內(nèi)一致。

（4）在裝填色譜柱時(shí)不得有氣泡存在，因?yàn)闅馀輹?huì)攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低分離效果。