【題目】下表是幾種限制酶識別序列及其切割位點，圖1、圖2中標(biāo)注了相關(guān)限制酶的酶切位點，其中切割位點相同的酶不重復(fù)標(biāo)注。請回答下列問題：

限制酶

BamHⅠ

BclⅠ

Sau3AⅠ

HindⅢ

識別序

列及切

割位點

(1)用圖中質(zhì)粒和目的基因構(gòu)建重組質(zhì)粒，應(yīng)選用________兩種限制酶切割，酶切后的載體和目的基因片段，通過________酶作用后獲得重組質(zhì)粒。為了擴增重組質(zhì)粒，需將其轉(zhuǎn)入處于________態(tài)的大腸桿菌。

(2)為了篩選出轉(zhuǎn)入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌，應(yīng)在篩選平板培養(yǎng)基中添加________，平板上長出的菌落，常用PCR鑒定，所用的引物組成為圖2中______________。

(3)若BamHⅠ酶切的DNA末端與BclⅠ酶切的DNA末端連接，連接部位的6個堿基對序列為_______，對于該部位，這兩種酶________(填“都能”“都不能”或“只有一種能”)切開。

(4)若用Sau3AⅠ切圖1質(zhì)粒最多可能獲得________種大小不同的DNA片段。

【答案】（1）BclI和HindⅢ 連接 感受

（2）四環(huán)素 引物甲和引物丙

（3）都不能

（4）7

【解析】（1）選擇的限制酶在目的基因的兩側(cè)都應(yīng)該有切割位點，又因為用BamHⅠ酶會將兩個標(biāo)記基因都破壞，所以構(gòu)建基因表達載體時只能選擇BclI和HindⅢ對質(zhì)粒和目的基因進行切割，漏出兩種不同的粘性末端，再利用DNA連接酶將兩者定向連接。再將重組質(zhì)粒導(dǎo)入感受態(tài)的大腸桿菌進行擴增。

（2）由于構(gòu)建重組質(zhì)粒的時候，氨芐青霉素抗性基因被破壞，而四環(huán)素的抗性基因沒有被破壞，所以為了篩選出轉(zhuǎn)入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌，應(yīng)在篩選平板培養(yǎng)基中添加四環(huán)素。根據(jù)圖2可知對目的基因進行擴增時的引物應(yīng)該是引物甲和引物丙。

（3）根據(jù)表格中堿基分析，若BamH I酶切的DNA末端與Bcl I酶切的DNA末端連接，連接部位的6個堿基對序列為，對于該部位，這兩種酶都不能切開。

（4）根據(jù)表格分析可知Sau3A I可以切割BclI和BamHⅠ的切割位點，所以若用Sau3A I切圖1質(zhì)粒最多可能獲得7種大小不同的DNA片段。

練習(xí)冊系列答案
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A. 圖中的a、b、c代表的所有生物，共同組成一個生物群落

B. 圖中a營養(yǎng)級各種生物之間緊密聯(lián)系，不具有競爭關(guān)系

C. 圖中所示各營養(yǎng)級生物的數(shù)量發(fā)生變化，但物種的豐富度基本未變

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(1)通過基因工程生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因小鼠，其核心是__________________，所需工具除了載體、限制性核酸內(nèi)切酶外，還需要________。

A．DNA聚合酶 B．DNA連接酶

C．RNA聚合酶 D．解旋酶

(2)據(jù)圖分析，1的受體2為________細胞；該轉(zhuǎn)基因小鼠的性別取決于______(填“甲”或“乙”)。若要檢測該轉(zhuǎn)基因小鼠中目的基因是否成功表達，則可以從小鼠的________中提取生長激素，進行特異性檢測。

(3)該實驗涉及胚胎移植、______________等胚胎工程技術(shù)。胚胎移植前，需要對丙的處理是________________________________________________________________________。

若要獲得多只和丙具有相同遺傳物質(zhì)的小鼠，可以對早期胚胎進行__________處理。

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A. ①②過程應(yīng)使用不同的限制性內(nèi)切酶

B. ①②過程都要使用DNA連接酶

C. 終止密碼子是基因表達載體的重要組成部分

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(1)衡量本實驗結(jié)果的指標(biāo)是_______。

(2)上述圖中最有效的是____培養(yǎng)皿中的抗生素。

(3)用上述最有效的抗生素對細菌進行處理,并測定細菌數(shù)量變化,如下圖所示。

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