Question

12．中國(guó)科學(xué)家成功將肝再生增強(qiáng)因子（hALR）的基因?qū)�入羊的乳腺上皮�?xì)胞中，再利用核移植技術(shù)培育出了轉(zhuǎn)基因克隆羊，其乳汁含有hALR．回答下列問(wèn)題：
（1）在體外，可通過(guò)PCR技術(shù)擴(kuò)增hALR基因，該技術(shù)依據(jù)的原理是DNA雙鏈復(fù)制．為了保證PCR反應(yīng)的進(jìn)行，反應(yīng)體系需要加入耐高溫Taq（DNA聚合）酶、模板DNA、dCTP、dATP、dGTP、dTTP、引物等．
（2）將外源hALR基因?qū)�入乳腺上皮�?xì)胞常用的方法是顯微注射法，檢測(cè)其染色體上是否整合了hALR基因，可采用DNA分子雜交技術(shù)；將乳腺上皮細(xì)胞的細(xì)胞核移植到受體卵母細(xì)胞之前，對(duì)受體卵母細(xì)胞的處理是培養(yǎng)至MⅡ中期并去核．
（3）與轉(zhuǎn)基因工程菌（大腸桿菌）相比，利用羊乳腺生產(chǎn)出的hALR有生物活性，其原因可能是hALR合成后需要經(jīng)過(guò)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體的加工才具備生物活性．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
1、目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
2、基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
3、將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
4、目的基因的檢測(cè)與鑒定：
（1）分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．
（2）個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）PCR技術(shù)依據(jù)的原理是DNA雙鏈復(fù)制．為了保證PCR反應(yīng)的進(jìn)行，反應(yīng)體系需要加入耐高溫Taq（DNA聚合）酶、模板DNA、dCTP、dATP、dGTP、dTTP、引物等．
（2）將外源hALR基因?qū)�入乳腺上皮�?xì)胞常用的方法是顯微注射法，檢測(cè)其染色體上是否整合了hALR基因，可采用DNA分子雜交技術(shù)；將乳腺上皮細(xì)胞的細(xì)胞核移植到受體卵母細(xì)胞之前，受體卵母細(xì)胞需要培養(yǎng)至減數(shù)第二次分裂中期，并且需要去核．
（3）原核細(xì)胞只有核糖體，沒(méi)有其它細(xì)胞器，因此與轉(zhuǎn)基因工程菌（大腸桿菌）相比，利用羊乳腺生產(chǎn)出的hALR有生物活性，原因是hALR合成后需要經(jīng)過(guò)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體的加工才具備生物活性．
故答案為：
（1）DNA雙鏈復(fù)制       Taq（DNA聚合）       引物
（2）顯微注射法    DNA分子雜交     培養(yǎng)至MⅡ中期并去核
（3）hALR合成后需要經(jīng)過(guò)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體的加工才具備生物活性

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程、細(xì)胞核移植、原核細(xì)胞和真核細(xì)胞的異同點(diǎn)等知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的工具及操作步驟；識(shí)記原核細(xì)胞和真核細(xì)胞在細(xì)胞結(jié)構(gòu)上的區(qū)別．