Question

12．我國目前臨床使用的乙肝疫苗大多為基因工程疫苗，其有效成分是一種叫做乙肝表面抗原的蛋白質(zhì)（S蛋白），對應(yīng)的基因為s基因．請回答：
（1）在構(gòu)建重組DNA分子時，要用限制性核酸內(nèi)切酶處理s基因和載體DNA，并用DNA連接酶使兩者結(jié)合．將重組DNA分子導(dǎo)入到哺乳動物細(xì)胞，經(jīng)篩選得到工程細(xì)胞．
（2）在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，工程細(xì)胞在生長過程中有接觸抑制現(xiàn)象，需要定期使用胰蛋白酶處理，以便于分瓶培養(yǎng)．
（3）為提髙工程細(xì)胞培養(yǎng)的成功率，下列措施中不需采用的是A．
A．取單個細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)   B．加入胰島素
C．二氧化碳培養(yǎng)箱          D．加入動物血清
（4）由于哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)較難，成本較高，近些年科學(xué)家們又發(fā)明了“乳腺生物發(fā)生器”，進(jìn)而從轉(zhuǎn)基因動物的乳汁中提取所需產(chǎn)品．在這種技術(shù)中，作為重組DNA分子受體細(xì)胞的一般是受精卵．

Answer 1

分析 1、基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等．（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物�?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．
2、動物細(xì)胞培養(yǎng)的過程：取動物組織塊→剪碎組織→用胰蛋白酶處理分散成單個細(xì)胞→制成細(xì)胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液中（原代培養(yǎng)）→放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)→貼滿瓶壁的細(xì)胞用酶分散為單個細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液（傳代培養(yǎng)）→放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)．
3、動物細(xì)胞培養(yǎng)的條件：
（1）無菌、無毒的環(huán)境：①消毒、滅菌；②添加一定量的抗生素；③定期更換培養(yǎng)液，以清除代謝廢物．
（2）營養(yǎng)物質(zhì)：糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然物質(zhì)．
（3）溫度和PH：36.5℃±0.5℃；適宜的pH：7.2～7.4．
（4）氣體環(huán)境：95%空氣（細(xì)胞代謝必需的）和5%的CO₂（維持培養(yǎng)液的PH）．

解答 解：（1）在構(gòu)建重組DNA分子時，要用限制性核酸內(nèi)切酶處理s基因和載體DNA，并用DNA連接酶使兩者結(jié)合．
（2）在動物細(xì)胞培養(yǎng)過程中存在接觸抑制現(xiàn)象，需要定期使用胰蛋白酶處理，以便于分瓶培養(yǎng)．
（3）A、取單個細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)不會提髙工程細(xì)胞培養(yǎng)的成功率，A錯誤；
B、胰島素能促進(jìn)血糖進(jìn)入組織細(xì)胞，因此提髙工程細(xì)胞培養(yǎng)的成功率，應(yīng)該在培養(yǎng)基添加胰島素，B正確；
C、動物細(xì)胞培養(yǎng)時需要一定的氣體環(huán)境，因此需要放在二氧化碳培養(yǎng)箱，C正確；
D、動物細(xì)胞培養(yǎng)時，為了給細(xì)胞提供充足的營養(yǎng)，需要在培養(yǎng)基中加入動物血清，D正確．
故選：A．
（4）培育轉(zhuǎn)基因動物時，應(yīng)該以受精卵作為受體細(xì)胞，因為受精卵的全能性最高．
故答案為：
（1）s基因和載體DNA      DNA連接
（2）接觸抑制      胰蛋白     
（3）A     
（4）受精卵

點評 本題考查基因工程和細(xì)胞工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的概念、操作工具及操作步驟；識記動物細(xì)胞培養(yǎng)的過程及條件，能結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確答題．