Question

3．在用基因工程技術(shù)構(gòu)建抗除草劑的轉(zhuǎn)基因煙草的過程中，下列操作錯(cuò)誤的是（　�。�

• A． 用DNA連接酶連接經(jīng)切割的抗除草劑基因和載體
• B． 用限制性核酸內(nèi)切酶切割煙草花葉病毒的核酸
• C． 將重組DNA分子導(dǎo)入煙草體細(xì)胞
• D． 用含除草劑的培養(yǎng)基篩選轉(zhuǎn)基因煙草細(xì)胞

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：A、構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，需要用限制酶切割得到抗除草劑基因和切開載體，再用DNA連接酶將兩者連接形成重組DNA，A正確；
B、限制性核酸內(nèi)切酶只能切割特定的脫氧核苷酸序列，而煙草花葉病毒的核酸是核糖核酸，且為單鏈，B錯(cuò)誤；
C、基因表達(dá)載體構(gòu)建好之后，需要將重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞（煙草原生質(zhì)體），C正確；
D、基因工程的最后一步是目的基因的檢測和鑒定，可以用含有除草劑的培養(yǎng)基篩選轉(zhuǎn)基因煙草細(xì)胞，D正確．
故選：B．

點(diǎn)評 本題考查基因工程相關(guān)知識(shí)，包括基因工程的工具、操作步驟等知識(shí)點(diǎn)，相關(guān)內(nèi)容不僅需要考生識(shí)記，還需要考生理解，特別是A選項(xiàng)，要求考生掌握限制酶的特點(diǎn)，明確限制酶只能切割特定的脫氧核苷酸序列，不能切割核糖核苷酸序列．