Question

8．回答基因工程的相關(guān)問題：
如表是幾種限制酶識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)，圖1、圖2中標(biāo)注了相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)，請回答下列問題：

限制酶	BamHⅠ	BclⅠ	Sau3AⅠ	HindⅢ
識(shí)別序列及切割位點(diǎn)

（1）用圖1、2中質(zhì)粒和目的基因構(gòu)建重組質(zhì)粒，應(yīng)選用BclI酶和HindⅢ酶切割，酶切后的質(zhì)粒和目的基因片段，通過DNA連接酶 酶作用后獲得重組質(zhì)粒．
（2）若用上述限制酶獲得的目的基因長度為1.0kb（1kb=1000對堿基），質(zhì)粒長度為3.2kb，則獲得重組質(zhì)粒的長度為A．
A．＜4.2kb             B．＞4.2kb                 C．=4.2kb
（3）重組質(zhì)粒成功導(dǎo)入受體細(xì)胞的概率一般僅在10^-7，為了篩選出導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌，在導(dǎo)入完成后，將所有大腸桿菌分別在含有四環(huán)素和氨芐青霉素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，大腸桿菌在兩種培養(yǎng)基的生長狀況不可能的是A，可能性最大的是D．
A．在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上能正常生長，在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上不能正常生長
B．在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上能正常生長，在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上不能正常生長
C．在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基和含四環(huán)素的培養(yǎng)基上都能正常生長
D．在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基和含四環(huán)素的培養(yǎng)基上都不能正常生長
（4）用Sau3A I限制酶能（填 能或不能）識(shí)別并切割BamHI酶的識(shí)別序列，若用Sau3A I限制酶完全切割圖1質(zhì)粒時(shí)，可獲得7種大小不同的DNA片段．
（5）若想在山羊的乳汁中收獲上述目的基因的表達(dá)產(chǎn)物，則需將重組質(zhì)粒導(dǎo)入至山羊的受精卵細(xì)胞中，那么上述過程屬于B．
A．人類基因工程     B．動(dòng)物基因工程       C．植物基因工程     D．微生物基因工程．

Answer 1

分析 1、分析圖1：外源DNA上含有限制酶BclI、BamHⅠ、HindIII和Sau3A I的切割位點(diǎn)，其中限制酶BclI、BamHⅠ、HindIII的識(shí)別序列都能被Sau3k I識(shí)別．
2、分析圖2：質(zhì)粒上有限制酶BclI、BamHⅠ、HindIII三種限制酶的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)，其中BamHⅠ的切割位點(diǎn)位于兩種抗生素抗性基因上．
3、選擇的限制酶應(yīng)在目的基因兩端存在識(shí)別位點(diǎn)，但使用BamHⅠ可能破壞質(zhì)粒中的兩種抗性基因，BclI和HindⅢ都只會(huì)破壞氨芐青霉素抗性基因，四環(huán)素抗性基因完好，因此只能選BclI和HindⅢ兩種限制酶切割．

解答 解：（1）選擇的限制酶應(yīng)在目的基因兩端存在識(shí)別位點(diǎn)，但使用BamHⅠ可能破壞質(zhì)粒中的兩種抗性基因，BclI和HindⅢ都只會(huì)破壞氨芐青霉素抗性基因，四環(huán)素抗性基因完好，因此只能選BclI和HindⅢ兩種限制酶切割．酶切后的載體和目的基因片段，通過連接酶作用后獲得重組質(zhì)粒．
（2）質(zhì)粒被BclI和HindⅢ切割后，會(huì)丟失兩種酶切割位點(diǎn)之間的一段DNA，參與形成重組質(zhì)粒的質(zhì)粒長度＜3.2kb，因此獲得重組質(zhì)粒的長度＜1+3.2=4.2kb．故選：A．
（3）在形成重組質(zhì)粒時(shí)，破壞了氨芐青霉素抗性基因，但四環(huán)素抗性基因完好．成功導(dǎo)入重組質(zhì)粒的理想大腸桿菌，應(yīng)該具有四環(huán)素抗性特性，不具有抗氨芐青霉素特性，即在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上能正常生長，在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上不能正常生長．但重組質(zhì)粒成功導(dǎo)入受體細(xì)胞的概率一般僅在10^-7，因此可能出現(xiàn)含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌、不含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌．因此將所有大腸桿菌分別在含有四環(huán)素和氨芐青霉素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，大腸桿菌在兩種培養(yǎng)基的生長狀況不可能的是在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上能正常生長，在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上不能正常生長．因?yàn)楹�有重組質(zhì)粒的大腸桿菌中氨芐青霉素抗性基因已被破壞了，但四環(huán)素抗性基因完好，因此肯定具有四環(huán)素抗性特性；不含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌都不具有抗性特性．又因?yàn)橹亟M質(zhì)粒成功導(dǎo)入受體細(xì)胞的概率一般僅在10^-7，成功概率較小，大多數(shù)大腸桿菌是不含有重組質(zhì)粒，因此可能性最大的在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基和含四環(huán)素的培養(yǎng)基上都不能正常生長．
（4）根據(jù)表格中信息可知：BamHI酶識(shí)別和切割序列為，Sau3k I識(shí)別和切割的序列，可知BamHI酶的識(shí)別序列包含有Sau3k I識(shí)別的序列，因此用Sau3A I限制酶能識(shí)別并切割BamHI酶的識(shí)別序列．由此類推可知：限制酶BclI、BamHⅠ、HindIII的識(shí)別序列都能被Sau3k I識(shí)別，因此用Sau3k I切圖質(zhì)粒最多可能獲得7種大小不同的DNA片段．
（5）將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞中，通常以受精卵作為受體細(xì)胞．該技術(shù)是動(dòng)物基因工程的范疇．
故答案為：
（1）HindⅢDNA連接酶
（2）A
（3）A  D
（4）能    7
（5）受精卵  B

點(diǎn)評 本題結(jié)合基因結(jié)構(gòu)圖和運(yùn)載體結(jié)構(gòu)圖，考查基因工程的技術(shù)和原理，重點(diǎn)是限制酶和DNA連接酶，要求考生認(rèn)真分析圖1和圖2，能根據(jù)圖中和表中信息選擇合適的限制酶，準(zhǔn)確判斷使用DNA連接酶連接的結(jié)果，再運(yùn)用所學(xué)的知識(shí)答題．