Question

19．胰島B細(xì)胞移植是一種有效治療糖尿病的方法．利用小鼠再生胰腺提取物（RPE）可定向誘導(dǎo)人
羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞（hAMSCs）分化成胰島B細(xì)胞．回答問題：
（1）取人羊膜組織刮除血塊的上皮細(xì)胞，沖洗后剪碎，然后用胰蛋白酶處理，最終制成hAMSCs懸液，將細(xì)胞懸液放入培養(yǎng)瓶中進(jìn)行原代培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)胞帖壁生長到一定階段時，出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象，此時細(xì)胞停止分裂增殖，這時需要將細(xì)胞進(jìn)行相關(guān)處理，然后進(jìn)行傳代培養(yǎng)．
（2）取傳至第3帶的hAMSCs放入細(xì)胞培養(yǎng)板，同時加入RPE進(jìn)行誘導(dǎo)分化培養(yǎng)．該代hAMSCs能保持細(xì)胞正常的核型．誘導(dǎo)分化培養(yǎng)15天后，提取細(xì)胞mRNA，用胰島素基因探針進(jìn)行分子雜交，可初步檢測hAMSCs是否分化成胰島B細(xì)胞．
（3）hAMSCs細(xì)胞在RPE作用下，可以定向分化形成具有正常胰島B細(xì)胞功能的細(xì)胞，其根本原因是基因選擇性表達(dá)．培養(yǎng)hAMSCs細(xì)胞的培養(yǎng)液中營養(yǎng)成分包括糖、氨基酸、無機(jī)鹽、血清（至少寫兩種）
（4）人體器官移植面臨的主要問題有供體器官短缺和免疫排斥，目前臨床通過使用免疫抑制劑抑制T細(xì)胞的增殖來提高器官移植的成活率．

Answer 1

分析 1、動物細(xì)胞培養(yǎng)的過程：取動物組織塊→剪碎組織→用胰蛋白酶處理分散成單個細(xì)胞→制成細(xì)胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液中（原代培養(yǎng)）→放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)→貼滿瓶壁的細(xì)胞用酶分散為單個細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液（傳代培養(yǎng)）→放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)．
2、胚胎干細(xì)胞的主要用途是：
①可用于研究哺乳動物個體發(fā)生和發(fā)育規(guī)律；
②是在體外條件下研究細(xì)胞分化的理想材料．ES細(xì)胞在飼養(yǎng)層細(xì)胞上或在添加抑制因子的培養(yǎng)液中，能夠維持不分化的狀態(tài)．在培養(yǎng)液中加入分化誘導(dǎo)因子，如牛黃酸、丁酰環(huán)腺苷酸等化學(xué)物質(zhì)時，就可以誘導(dǎo)ES細(xì)胞向分化，這為揭示細(xì)胞分化和細(xì)胞凋亡機(jī)理提供了有效的手段；
③可以用于治療人類的某些頑疾，如帕金森綜合癥、糖尿病、老年癡呆癥、肝衰竭、新衰竭、成骨不良；
④培育各種組織器官，用于器官移植，解決供體器官不足和器官移植后免疫排斥的問題．

解答 解：（1）取人羊膜組織刮除血塊、上皮細(xì)胞，沖洗后剪碎，然后用胰蛋白酶（或膠原蛋白酶）處理，最終制成hAMSCs懸液．將細(xì)胞懸液放人培養(yǎng)瓶中進(jìn)行原代培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)胞貼壁生長到一定階段時，出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象，此時細(xì)胞停止分裂增殖，這時需要將細(xì)胞進(jìn)行相關(guān)處理，然后進(jìn)行傳代培養(yǎng)．
（2）10代以內(nèi)的細(xì)胞可以保持正常的二倍體核型，因此傳至第 3 代的hAMSCs能保持細(xì)正常的（二倍體）核型．細(xì)胞分化的實質(zhì)是基因的選擇性表達(dá)，因此要檢測 hAMSCs 是否分化成胰島 B 細(xì)胞，在誘導(dǎo)分化培養(yǎng)15天后，可提取細(xì)胞的RNA（或mRNA），用胰島素基因探針進(jìn)行分子雜交．
（3）hAMSCs細(xì)胞在RPE作用下，可以定向分化形成具有正常胰島B細(xì)胞功能的細(xì)胞，其根本原因是基因選擇性表達(dá)．培養(yǎng)hAMSCs細(xì)胞的培養(yǎng)液中營養(yǎng)成分包括糖、氨基酸、無機(jī)鹽、血清．
（4）人體器官移植面臨的主要問題有供體器官短缺和免疫排斥，目前臨床通過使用免疫抑制劑抑制T細(xì)胞的增殖來提高器官移植的成活率．
故答案為：
（1）胰蛋白酶      接觸抑制
（2）核型     mRNA
（3）基因選擇性表達(dá)        糖、氨基酸、無機(jī)鹽、血清
（4）免疫抑制劑

點評 本題考查動物細(xì)胞培養(yǎng)、胚胎干細(xì)胞的研究與應(yīng)用等知識，意在考查考生的識記能力和理解所學(xué)知識要點，把握知識間內(nèi)在聯(lián)系，形成知識網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的能力；能運(yùn)用所學(xué)知識，準(zhǔn)確判斷問題的能力，屬于考綱識記和理解層次的考查．