Question

【題目】某植物蛋白酶抑制劑Ⅱ基因是重要的抗蟲基因，該基因轉(zhuǎn)錄的mRNA下游序列已知，但其上游序列未知�，F(xiàn)利用PCR等技術(shù)擴(kuò)增該基因，具體原理如下圖所示，其中①③表示有關(guān)過程，ⅠⅢ表示有關(guān)物質(zhì)。請回答下列問題：

（1）過程①反應(yīng)體系中，需要加入__________種引物，還需加入__________酶，生成雜合鏈物質(zhì)Ⅰ。

（2）利用DNA末段轉(zhuǎn)移酶催化過程②，使cDNA單鏈左側(cè)末端增加十多個腺嘌呤脫氧核苷酸序列（AAA(A)n），其目的是_________________，進(jìn)而利于過程③擴(kuò)增獲得目的基因序列Ⅲ，過程③反應(yīng)體系需要添加的新引物序列是____________________。

（3）與物質(zhì)Ⅲ相比，物質(zhì)Ⅰ化學(xué)組成不同的是____________________。與過程③相比，過程①中堿某配對方式的不同之處是__________。

（4）在物質(zhì)Ⅲ的兩端通常還需要增加__________序列，以便與相應(yīng)的載體重組，再利用__________處理大腸桿菌等，以利于將重組質(zhì)粒導(dǎo)入細(xì)胞，構(gòu)建cDNA文庫。

Answer 1

【答案】 1 逆轉(zhuǎn)錄 便于設(shè)計引物 TTT(T)n 含核糖和尿嘧啶（U） U-A 限制酶識別 （冰凍的）Ca2+

【解析】試題分析：據(jù)圖分析，過程①表示以mRNA為模板逆轉(zhuǎn)錄形成DNA的過程，需要1種引物；過程②表示在DNA末段轉(zhuǎn)移酶催化作用下，在cDNA單鏈左側(cè)末端增加十多個腺嘌呤脫氧核苷酸序列（AAA(A)n）的過程；過程③表示利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因的過程。

（1）根據(jù)以上分析已知，過程①表示以mRNA為模板逆轉(zhuǎn)錄形成DNA的過程，需要1種引物，且需要逆轉(zhuǎn)錄酶的催化。

（2）過程②在cDNA末端增加十多個腺嘌呤脫氧核苷酸序列（AAA(A)n），其目的是便于設(shè)計引物，因此在過程③擴(kuò)增獲得目的基因序列Ⅲ時，反應(yīng)體系需要添加的新引物序列是TTT(T)n。

（3）據(jù)圖分析可知，物質(zhì)Ⅲ的兩條鏈都是DNA鏈，而物質(zhì)Ⅰ的一條鏈?zhǔn)荄NA鏈、一條鏈?zhǔn)荝NA鏈，因此物質(zhì)Ⅰ化學(xué)組成與Ⅲ相比的不同之處在于物質(zhì)Ⅰ含有核糖和尿嘧啶；且與過程③相比，過程①中特有的堿某配對方式是U-A。

（4）根據(jù)題意分析，過程③表示利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因的過程，因此在目的基因（物質(zhì)Ⅲ）兩端通常還需要增加限制酶識別序列，以便限制酶的識別與切割；將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌前，需要先用鈣離子處理大腸桿菌，使之成為感受態(tài)細(xì)胞。