Question

1．pBR322質(zhì)粒是基因工程中經(jīng)常選用的工具，如圖Ⅰ所示．目的基因如果插入質(zhì)粒的某抗性基因中，將使該基因失活．為了檢查運(yùn)載體是否導(dǎo)入原本無(wú)Amp^r 和Tet^r的大腸桿菌，將大腸桿菌在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖Ⅱ的菌落．再將滅菌絨布按到培養(yǎng)基上，使絨布面沾上菌落，然后將絨布按到含四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖Ⅲ的結(jié)果（空圈表示與Ⅱ?qū)φ諢o(wú)菌落的位置）．
（1）pBR322質(zhì)粒在基因工程中的作用是作為運(yùn)載體．

（2）如圖是pBR322質(zhì)粒上被某種酶識(shí)別的一段特定序列．a(chǎn)處被切割后，產(chǎn)生的暴露出來(lái)的單鏈堿基序列是-TGCA或ACGT-．如果要從生物細(xì)胞中分離目的基因，首先需要進(jìn)行基因定位，然后再用上述酶切割．將目的基因與質(zhì)粒連接起來(lái)的酶作用于圖中的a處．
（3）與圖Ⅲ空圈相對(duì)應(yīng)的圖Ⅱ中的菌落表現(xiàn)型是能抗氨芐青霉素，但不能抗四環(huán)素，由此說(shuō)明目的基因插入了Tet^r中．

Answer 1

分析 1、目的基因?qū)�入受體細(xì)胞后通過(guò)標(biāo)記基因進(jìn)行篩選，Ⅲ中空圈處表示與Ⅱ?qū)φ諢o(wú)菌落的位置，形成的原因是抗生素的選擇作用，如抗性基因被破壞則細(xì)菌不能生存．
2、轉(zhuǎn)錄的起始位置位于模板鏈上的堿基序列TAC（因?yàn)槠鹗济艽a子是AUG）．

解答 解：（1）基因工程中通常用質(zhì)粒作運(yùn)載體．
（2）a處被切割后，上側(cè)鏈暴露出來(lái)的單鏈堿基序列是-TGCA，下側(cè)鏈暴露出來(lái)的單鏈堿基序列是ACGT-；要從細(xì)胞中分離目的基因，首先要進(jìn)行基因定位，然后用限制酶將目的基因切割下來(lái)，通過(guò)DNA連接酶將目的基因與質(zhì)粒的黏性末端連接起來(lái)，形成磷酸二酯鍵，即連接a處．
（3）大腸桿菌在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)進(jìn)行篩選，所以培養(yǎng)基是選擇培養(yǎng)基；空圈表示與Ⅱ?qū)φ諢o(wú)菌落的位置，Ⅱ培養(yǎng)基中加入含氨芐青霉素，Ⅲ培養(yǎng)基中加入四環(huán)素，所以空圈處表示能抗氨芐青霉素，但不能抗四環(huán)素，所以目的基因插入在抗四環(huán)素基因中，即Tet^r中．
故答案為：
（1）作為運(yùn)載體        
（2）-TGCA或ACGT-基因定位     a  
（3）能抗氨芐青霉素，但不能抗四環(huán)素      Tet^r

點(diǎn)評(píng) 本題考查了基因工程技術(shù)應(yīng)用的相關(guān)知識(shí)，意在考查考生的識(shí)圖能力和分析理解能力，解題關(guān)鍵：①理解空圈形成的原因；②正確識(shí)圖，會(huì)從圖3中找出轉(zhuǎn)錄的起始位置．