Question

20．Rag₂基因缺失小鼠不能產(chǎn)生成熟的淋巴細(xì)胞．科研人員利用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）對(duì)Rag₂基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療．其技術(shù)流程如圖：

（1）步驟①中，在核移植前應(yīng)去除卵母細(xì)胞的細(xì)胞核．
（2）步驟②中，重組胚胎培養(yǎng)到囊胚期時(shí)，可從其內(nèi)細(xì)胞團(tuán)分離出ES細(xì)胞．
（3）步驟③中，需要構(gòu)建含有基因Rag₂的表達(dá)載體．可以根據(jù)基因Rag₂的核苷酸序列設(shè)計(jì)引物，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增Rag₂基因片段．用HindⅢ和PstⅠ限制酶分別在片段兩側(cè)進(jìn)行酶切獲得Rag₂基因片段．為將該片段直接連接到表達(dá)載體，所選擇的表達(dá)載體上應(yīng)具有Hindlll和PstI酶的酶切位點(diǎn)．
（4）步驟④在特定的誘導(dǎo)下ES細(xì)胞成功分化為造血干細(xì)胞其原因是選擇性表達(dá)的結(jié)果．
（5）為檢測Rag₂基因的表達(dá)情況，可提取治療后小鼠骨髓細(xì)胞的蛋白質(zhì)，用Rag₂蛋白的抗體進(jìn)行雜交實(shí)驗(yàn)．

Answer 1

分析 分析題圖：①表示核移植過程；②表示早期胚胎培養(yǎng)過程；③表示將目的基因?qū)�入ES細(xì)胞．④體外誘導(dǎo)ES細(xì)胞分裂分化造血干細(xì)胞，然后進(jìn)行造血干細(xì)胞移植．

解答 解：（1）核移植是將體細(xì)胞核移植到去核的卵母細(xì)胞中，所以實(shí)驗(yàn)前要去除卵母細(xì)胞的細(xì)胞核．
（2）步驟②中，重組胚胎培養(yǎng)到囊胚期，可從其內(nèi)細(xì)胞團(tuán)分離出ES細(xì)胞．
（3）步驟③是將目的基因?qū)�入ES細(xì)胞，該過程之前需要構(gòu)建基因表達(dá)載體；可以根據(jù)基因Rag₂的核苷酸序列設(shè)計(jì)引物，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增Rag₂基因片段．用HindⅢ和PstⅠ限制酶分別在片段兩側(cè)進(jìn)行酶切獲得Rag₂基因片段．為將該片段直接連接到表達(dá)載體，所選擇的表達(dá)載體上應(yīng)具有Hindlll和Pst I酶的酶切位點(diǎn)．
（4）步驟④在特定的誘導(dǎo)下ES細(xì)胞成功分化為造血干細(xì)胞，而分化的實(shí)質(zhì)是基因的選擇性表達(dá)．
（5）為檢測Rag₂基因是否表達(dá)，可以采用抗原-抗體（Rag₂蛋白）雜交法．
故答案為：
（1）細(xì)胞核
（2）囊胚 內(nèi)細(xì)胞團(tuán)
（3）核苷酸序列   Hindlll和Pst I
（4）選擇性表達(dá)
（5）蛋白質(zhì)

點(diǎn)評(píng) 本題以基因治療的流程圖為載體，考查了基因工程、細(xì)胞工程以及胚胎工程等方面的知識(shí)，難度適中．考生要能夠識(shí)記細(xì)胞核移植的過程；識(shí)記囊胚包括內(nèi)細(xì)胞團(tuán)和滋養(yǎng)層兩部分；明確基因工程中質(zhì)粒和目的基因需要利用同種限制酶進(jìn)行切割；掌握目的基因檢測和鑒定的一般方法等．