Question

12．病毒介導基因轉移是現在基因治療研究的最新方向，美、法等國成功采用腺病毒載體進行心、腦、肺、肝內膽管和肌肉組織的體內基因轉移．其具體思路如圖所示：

回答下列問題：
（1）如果要在短時間內獲得較多的目的基因，通常采用PCR技術，在操作步驟中包括兩次升溫和一次降溫，其中降溫的目的是使引物和模板鏈結合．
（2）構建基因表達載體時需要用到的工具酶有限制酶和DNA連接酶．
（3）作為接受轉移基因的體細胞應具有的特點是具有增殖優(yōu)勢（生命周期長，能存活幾月至幾年，最后可延續(xù)至病人的整個生命期；必須比較堅固，足以耐受處理）（寫出一點即可）．在進行細胞培養(yǎng)時，當細胞貼滿瓶壁時需用胰蛋白酶處理，使之分散成單個細胞，培養(yǎng)液中還需通人無菌氣體，其中通入CO₂的目的主要是維持培養(yǎng)液的PH．
（4）如果檢測發(fā)現目的基因被成功導入了受體細胞，但卻沒有檢測到目的基因相對應的蛋白質，應考慮位于目的基因首端的啟動子和末端的終止子是否設計好，并從這方面進一步改善．

Answer 1

分析 1、PCR技術擴增目的基因
（1）原理：DNA雙鏈復制
（2）過程：第一步：加熱至90～95℃DNA解鏈；第二步：冷卻到55～60℃，引物結合到互補DNA鏈；第三步：加熱至70～75℃，熱穩(wěn)定DNA聚合酶從引物起始互補鏈的合成．
（3）條件：模板、原料、引物、耐高溫的DNA聚合酶等．
2、動物細胞培養(yǎng)的條件：
（1）無菌、無毒的環(huán)境：①消毒、滅菌；②添加一定量的抗生素；③定期更換培養(yǎng)液，以清除代謝廢物．
（2）營養(yǎng)物質：糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然物質．
（3）溫度和PH．
（4）氣體環(huán)境：95%空氣（細胞代謝必需的）和5%的CO₂（維持培養(yǎng)液的PH）．

解答 解：（1）如果要在短時間內獲得較多的目的基因，通常采用PCR技術，第一次升溫是使雙鏈解開，即高溫解鏈；降溫的目的是使引物和模板鏈結合，即低溫復性；第二次升溫是使DNA復制開始進行．．
（2）構建基因表達載體時需要用到的工具酶有限制酶和DNA連接酶．
（3）作為接受轉移基因的體細胞應具有的特點是 具有增殖優(yōu)勢；生命周期長，能存活幾月至幾年，最后可延續(xù)至病人的整個生命期；必須比較堅固，足以耐受處理等．在進行細胞培養(yǎng)時，當細胞貼滿瓶壁時需用胰蛋白酶處理，使之分散成單個細胞，培養(yǎng)液中還需通人無菌氣體，其中通入CO₂的目的主要是維持培養(yǎng)液的PH．
（4）基因表達載體包括啟動子、終止子、目的基因和標記基因，啟動子位于目的基因的首端，啟動基因的轉錄，終止子位于目的基因的末端，終止轉錄過程．
故答案為：
（1）PCR    使引物和模板鏈結合
（2）限制酶和DNA連接酶
（3）具有增殖優(yōu)勢（生命周期長，能存活幾月至幾年，最后可延續(xù)至病人的整個生命期；必須比較堅固，足以耐受處理）   胰蛋白    維持培養(yǎng)液的PH
（4）啟動子    終止子

點評 本題考查了基因工程和細胞工程的有關知識，要求考生能夠掌握基因工程的工具、操作步驟，識記PCR技術中三步驟的目的，識記動物細胞培養(yǎng)的過程，識記基因表達載體的組成等．