Question

毛角蛋白Ⅱ型中間絲（KIFⅡ）基因與絨山羊的羊絨質量密切相關．獲得轉KIFⅡ基因的高絨質絨山羊的簡單流程如圖，認真看圖后回答問題．

（1）過程①中最常用的運載工具是質粒，此外，噬菌體的衍生物和

 

也可以做運載體，人工合成的KIFⅡ基因基因可通過

 

技術手段體外迅速擴增．
（2）要將重組質粒導入羊胎兒成纖維細胞的方法是

 

，重組質粒導入之后，可通過

 

技術，來檢測KIFⅡ基因是否已重組到羊胎兒成纖維細胞的染色體DNA上．
（3）在過程②中，從羊的胚胎中取胎兒成纖維細胞，用

 

處理，然后進行分散培養(yǎng)．培養(yǎng)時，將培養(yǎng)瓶置于含

 

（要求寫清楚每種氣體所占比例）的混合氣體培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)，培養(yǎng)液的配方通常含有葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素等，一般還應添加

 

．當貼壁的成纖維細胞分裂生長到細胞表面相互接觸時，細胞會停止生長，這種現(xiàn)象成為細胞的

 

．
（4）在過程③中，用

 

處理以獲取更多的卵（母）細胞．卵（母）細胞應培養(yǎng)
到

 

期．成熟卵（母）細胞在核移植前需要進行

 

處理．然后與成纖維細胞通過電刺激后融合，形成重組細胞．再利用物理或化學方法刺激，使之完成細胞分裂和發(fā)育，在體外培養(yǎng)成重組早期胚胎．
（5）從重組細胞到早期胚胎過程中所用的胚胎工程技術是

 

．將早期胚胎通過胚胎移植技術移入代孕母羊．早期胚胎在

 

期開始出現(xiàn)分化．胚胎移植前可通過

 

技術可獲得較多胚胎．

Answer 1

考點：基因工程的原理及技術,動物細胞與組織培養(yǎng)過程,胚胎分割移植

專題：

分析：分析題圖：圖示表示獲得轉KIFⅡ基因的高絨質絨山羊的簡單流程圖，其中①表示基因表達載體的構建過程，該過程需要限制酶、DNA連接酶和運載體；②表示動物細胞培養(yǎng)過程，該過程需要采用胰蛋白酶處理組織塊以獲得單個細胞；③表示卵母細胞的采集和培養(yǎng)過程．

解答： 解：（1）過程①表示基因表達載體的構建過程，常用的運載工具是質粒、噬菌體的衍生物和動植物病毒，人工合成的KIFⅡ基因基因可通過 PCR技術手段體外迅速擴增．
（2）將重組質粒導入羊胎兒成纖維細胞的方法是顯微注射法；重組質粒導入之后，可通過DNA分子雜交技術，來檢測KIFⅡ基因是否已重組到羊胎兒成纖維細胞的染色體DNA上．
（3）過程②表示動物細胞培養(yǎng)，從羊的胚胎中取胎兒成纖維細胞，用胰蛋白酶和膠原蛋白酶處理形成單個細胞．培養(yǎng)時，將培養(yǎng)瓶置于含95%的空氣（維持細胞代謝）和5%CO2（維持培養(yǎng)基（液）的pH）的混合氣體培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)，培養(yǎng)液的配方通常含有葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素等，一般還應添加動物血清．當貼壁的成纖維細胞分裂生長到細胞表面相互接觸時，細胞會停止生長，這種現(xiàn)象成為細胞的接觸抑制．
（4）過程③表示卵母細胞的采集和培養(yǎng)，要得到更多的卵（母）細胞需用促性腺激素對動物進行超數(shù)排卵處理，應培養(yǎng)到減數(shù)第二次分裂中期期；成熟卵（母）細胞在核移植前需要進行去核處理，以保證克隆后代的遺傳性狀主要來自于供體核．
（5）從重組細胞到早期胚胎需要才用早期胚胎培養(yǎng)技術；早期胚胎在囊胚期開始出現(xiàn)分化．在胚胎移植時，可通過胚胎分割技術獲得更多的胚胎．
故答案為：
（1）動植物病毒   PCR
（2）顯微注射法   DNA分子雜交
（3）胰蛋白酶     95%的空氣和5%CO2    動物血清   接觸抑制
（4）促性腺激素     減數(shù)第二次分裂中期     去核
（5）早期胚胎培養(yǎng)   囊胚期    胚胎分割

點評：本題結合轉基因山羊培育過程圖，考查基因工程、細胞工程和胚胎工程的相關知識，要求考生識記所列知識要點，能準確判斷圖中各過程的名稱，并能在較簡單的情境中使用，屬于考綱識記層次的考查．