Question

4．人組織纖溶酶原激活物（htPA）是一種重要的藥用蛋白，可在轉(zhuǎn)htPA基因母羊的羊乳中獲得．流程如下：

（1）htPA基 因可以直接從人體細(xì)胞中獲取，并通過技術(shù) 大量擴(kuò)增．htPA基因與載體用限制酶切割后，再通過DNA連接（酶）酶連接，以構(gòu)建重組表達(dá)載體．檢測目的基因是否已插入受體細(xì)胞DNA，可采用DNA分子雜交（或核酸探針）技術(shù)．
（2）為獲取更多的卵（母）細(xì) 胞，要對供體母羊注射促性腺激素，使其超數(shù)排卵．若受精作用發(fā)生在體內(nèi)，則有兩道屏障防止多精入卵，其中第一道屏障是透明帶反應(yīng)．
（3）將重組表達(dá)載體導(dǎo) 入羊受精卵常用的方法是顯微注射法．為了獲得轉(zhuǎn)基因母羊，移植前需對已成功轉(zhuǎn)入目的基因的胚胎進(jìn)行性別鑒定．對所獲得的胚胎進(jìn)行胚胎分割可獲得多個轉(zhuǎn)基因個體．
（4）若在轉(zhuǎn)htPA基因母羊的羊乳中檢測到htPA（或人組織纖溶酶原激活物），說明目的基因成功表達(dá)．

Answer 1

分析 DNA重組技術(shù)至少需要三種工具：限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）、DNA連接酶、運載體．
目的基因分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．
該基因工程需要對羊的性別進(jìn)行選擇，由于只有母羊能夠分泌乳汁，因此選擇母羊的胚胎進(jìn)行移植．

解答 解：（1）htPA基因可以直接從人體細(xì)胞中獲取，并通過技術(shù)PCR大量擴(kuò)增．htPA基因與載體用限制酶切割后，再通過DNA連接酶連接，以構(gòu)建重組表達(dá)載體．檢測目的基因是否已插入受體細(xì)胞DNA，可采用DNA分子雜交（或核酸探針）技術(shù)．
（2）為獲取更多的卵（母）細(xì)胞，要對供體母羊注射促性腺激素，使其超數(shù)排卵．若受精作用發(fā)生在體內(nèi)，則有兩道屏障防止多精入卵，其中第一道屏障是透明帶反應(yīng)，第二道屏障為卵黃膜的封閉作用．
（3）將重組表達(dá)載體導(dǎo)入羊受精卵常用的方法是顯微注射法．為了獲得轉(zhuǎn)基因母羊，移植前需對已成功轉(zhuǎn)入目的基因的胚胎進(jìn)行性別鑒定．對所獲得的胚胎進(jìn)行胚胎分割可獲得多個轉(zhuǎn)基因個體．
（4）若在轉(zhuǎn)htPA基因母羊的羊乳中檢測到htPA（或人組織纖溶酶原激活物），說明目的基因成功表達(dá)．
故答案為：
（1）PCR       DNA連接（酶）  DNA分子雜交（或核酸探針）
（2）超數(shù)排卵   透明帶反應(yīng)
（3）顯微注射法   性別鑒定    胚胎分割
（4）htPA（或人組織纖溶酶原激活物）

點評 本題考查了基因工程和胚胎工程的相關(guān)知識，要求考生能夠識記基因工程的操作步驟；明確該基因工程中需要選擇母羊進(jìn)行胚胎移植；要求考生具有扎實的基礎(chǔ)知識，難度適中，屬于考綱中識記、理解層次的考查．