Question

9．在培育轉(zhuǎn)基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因（kan）常作為標記基因，只有含卡那霉素抗性基因的細胞才能在卡那霉素培養(yǎng)基上生長．圖為獲得抗蟲棉的技術(shù)流程．請據(jù)圖回答：
（1）A過程需要的酶有：限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶
（2）將目的基因?qū)�入植物體細胞除了上述農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法之外，還可用花粉管通道法（任填一種）；可用抗原-抗體技術(shù)檢測轉(zhuǎn)基抗蟲棉是否成功表達出Bt毒蛋白；除抗蟲基因外，基因表達載體中還必須包含的部分是啟動子、終止子、標記基因（至少寫出兩點）．
（3）B選擇培養(yǎng)過程的培養(yǎng)基除含有必要營養(yǎng)物質(zhì)、瓊脂和激素外，還必須加入卡那霉素．
（4）由外植體培養(yǎng)為轉(zhuǎn)基因植株的D、E過程分別為脫分化、再分化該過程的理論基礎(chǔ)是細胞的全能性．

Answer 1

分析 根據(jù)題意和圖示分析可知：首先采用基因工程技術(shù)將抗蟲基因?qū)�入離體棉花葉片組織，其過程為：獲取目的基因（抗蟲基因）→構(gòu)建基因表達載體→將目的基因?qū)�入農(nóng)桿菌→用含有卡那霉素的選擇培養(yǎng)基篩選含有重組質(zhì)粒的土壤農(nóng)桿菌→利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)�入離體棉花葉片組織細胞．
其次采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，將導(dǎo)入抗蟲基因的細胞培養(yǎng)成轉(zhuǎn)基因抗蟲植株，其過程主要包括脫分化和再分化兩個步驟．

解答 解：（1）圖中A為基因表達載體的構(gòu)建過程，該過程需要限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和運載體，還需DNA連接酶將目的基因和運載體連接形成重組質(zhì)粒．
（2）將目的基因?qū)�入植物體細胞除了上述農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法之外，還可用花粉管通道法、基因槍法；可用抗原-抗體技術(shù)檢測轉(zhuǎn)基抗蟲棉是否成功表達出Bt毒蛋白；除抗蟲基因外，基因表達載體中還必須包含的部分是啟動子、終止子、標記基因．
（3）由圖可知，標記基因是卡那霉素抗性基因，因此可用含有卡那霉素的培養(yǎng)基篩選含有抗蟲基因的再生植株．
（4）根據(jù)植物組織培養(yǎng)過程可知，圖中D表示脫分化，E表示再分化，該過程的理論基礎(chǔ)是細胞的全能性．
故答案為：
（1）限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶
（2）花粉管通道     抗原-抗體     啟動子、終止子、標記基因
（3）卡那霉素
（4）脫分化、再分化    細胞的全能性

點評 本題結(jié)合轉(zhuǎn)基因抗蟲植株的培育過程圖，考查基因工程和植物組織培養(yǎng)的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的工具及操作步驟，能準確判斷圖中各過程的名稱，能結(jié)合圖中信息準確答題．