Question

7．人和哺乳動物的尿液中含有尿素，大量尿素的存在會對環(huán)境造成污染．土壤中有些細(xì)菌含有脲酶，可通過降解尿素作為其生長的氮源．某研究小組開展土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)．請回答下列問題：
（1）該實(shí)驗(yàn)中，在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，能產(chǎn)生脲酶的細(xì)菌在該培養(yǎng)基上生長一段時間后，其菌落周圍的指示劑將變成紅色．
（2）在接種前需要添加空白對照組以檢測培養(yǎng)基是否被污染，該空白對照組應(yīng)采取的操作要求和觀察指標(biāo)是將已滅菌、未接種的培養(yǎng)基在適宜溫度下放置相應(yīng)的時間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生．若在實(shí)驗(yàn)中，一同學(xué)的平板上菌落平均數(shù)為36個/平板，而空白對照組的一個平板上出現(xiàn)了6個菌落，這種結(jié)果說明在此實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)了污染現(xiàn)象．該同學(xué)將30（即36-6）個/平板作為本組菌落數(shù)的平均值，他的做法不正確（正確/不正確）．
（3）另一同學(xué)在五個培養(yǎng)基平板下均接種稀釋倍數(shù)為10⁵的土壤樣品液0.1mL，培養(yǎng)一段時問后，平板上長出的細(xì)菌菌落數(shù)分別為13、156、462、178和191．該過程采取的接種方法是稀釋涂布平板法，每克土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)量為1.75×10⁸個．

Answer 1

分析 1、微生物常見的接種的方法
①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落．
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落．
2、統(tǒng)計菌落數(shù)目的方法
（1）顯微鏡直接計數(shù)法
 ①原理：利用特定細(xì)菌計數(shù)板或血細(xì)胞計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物數(shù)量；②方法：用計數(shù)板計數(shù)； ③缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌．
（2）間接計數(shù)法（活菌計數(shù)法）
 ①原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌．通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌．
②操作
a、設(shè)置重復(fù)組，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性．
b、為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計數(shù)．
③計算公式：每克樣品中的菌株數(shù)=（c÷V）×M，其中c代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積（mL），M代表稀釋倍數(shù)．

解答 解：（1）分解尿素的細(xì)菌的鑒定細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成氨，氨會使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)．在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑培養(yǎng)細(xì)菌，若指示劑變紅，可確定該種細(xì)菌能夠分解尿素．
（2）在接種前需要添加空白對照組以檢測培養(yǎng)基是否被污染，該空白對照組應(yīng)采取的操作要求和觀察指標(biāo)是：將已滅菌、未接種的培養(yǎng)基在適宜溫度下放置相應(yīng)的時間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生．若在實(shí)驗(yàn)中，一同學(xué)的平板上菌落平均數(shù)為36個/平板，而空白對照組的一個平板上出現(xiàn)了6個菌落，這種結(jié)果說明在此實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)了污染現(xiàn)象．為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計數(shù)，因此該同學(xué)的做法不正確．
（3）另一同學(xué)在五個培養(yǎng)基平板下均接種稀釋倍數(shù)為10⁵的土壤樣品液0.1mL，培養(yǎng)一段時問后，平板上長出的細(xì)菌菌落數(shù)分別為13、156、462、178和191．該過程采取的接種方法是稀釋涂布平板法，每克土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)量為$\frac{156+178+191}{3}{×10}^{5}×10$=1.75×10⁸個．
故答案為：
（1）尿素       酚紅      紅
（2）將已滅菌、未接種的培養(yǎng)基在適宜溫度下放置相應(yīng)的時間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生       污染       不正確
（3）稀釋涂布平板法       1.75×10⁸

點(diǎn)評 本題考查微生物相關(guān)知識，要求考生識記幾種微生物常用的兩種方法，掌握稀釋涂布平板法計數(shù)微生物的方法，明確一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計數(shù)，再結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確答題．