Question

9．科學(xué)家將人的干擾素基因與質(zhì)粒重組后，導(dǎo)入牛的受精卵，并成功從牛奶中提取到了干擾素．請(qǐng)根據(jù)如下操作流程回答相關(guān)問題．（已知酶I的識(shí)別序列和切點(diǎn)是-G↓GATCC-，酶II的識(shí)別序列和切點(diǎn)是-↓GATC-）．

（1）基因表達(dá)載體的組成主要包括啟動(dòng)子，終止子，標(biāo)記基因，目的基因．
（2）構(gòu)建基因表達(dá)載體用到的酶是限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶．
（3）據(jù)圖分析，在構(gòu)建重組質(zhì)粒的過程中，目的基因用酶Ⅱ進(jìn)行了切割，質(zhì)粒用酶Ⅰ進(jìn)行了切割．檢驗(yàn)重組載體導(dǎo)入能否成功需要利用基因Ⅰ 作為標(biāo)記基因．
（4）研究人員通常采用技抗原--抗體雜交術(shù)檢測牛奶中是否含有干擾素．

Answer 1

分析 分析題圖：①②表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程，酶I的識(shí)別序列和切點(diǎn)是-G↓GATCC-，酶Ⅱ的識(shí)別序列和切點(diǎn)是-↓GATC-，可見限制酶Ⅱ也能識(shí)別酶I的識(shí)別序列并進(jìn)行切割，①②過程需用限制酶Ⅱ進(jìn)行切割；③表示將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞（受精卵）的過程，常采用顯微注射法．

解答 解：
（1）基因表達(dá)載體的構(gòu)建組成：目的基因+啟動(dòng)子+終止子+標(biāo)記基因
（2）構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，用限制酶切割目的基因和運(yùn)載體，再用DNA連接酶連接形成重組質(zhì)粒．
（3）在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，需用限制酶對(duì)目的基因和質(zhì)粒進(jìn)行切割以形成相同的黏性末端．質(zhì)粒如果用限制酶Ⅱ來切割的話，將會(huì)在質(zhì)粒在出現(xiàn)兩個(gè)切口且抗生素抗性基因全被破壞，故質(zhì)粒只能用限制酶Ⅰ切割（破壞四環(huán)素抗性而保留氨芐青霉素抗性，即將來形成的重組質(zhì)粒能在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基中生存，而在含四環(huán)素的培養(yǎng)基中不能生存）；目的基因兩端都出現(xiàn)黏性末端時(shí)才能和質(zhì)粒發(fā)生重組，故目的基因只有用限制酶Ⅱ切割時(shí)，才會(huì)在兩端都出現(xiàn)黏性末端．構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，基因I未被破壞，而基因Ⅱ被破壞，所以檢驗(yàn)重組載體導(dǎo)人是否成功需要利用基因I作為標(biāo)記基因．
（4）檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)，采用抗原-抗體雜交技術(shù)．
故答案為：
（1）啟動(dòng)子      終止子       標(biāo)記基因       目的基因      
（2）限制性核酸內(nèi)切酶          DNA連接酶    
（3）酶Ⅱ酶Ⅰ基因Ⅰ
（4）抗原--抗體雜交

點(diǎn)評(píng) 本題結(jié)合流程圖，考查基因工程、蛋白質(zhì)工程和胚胎工程的相關(guān)知識(shí)，意在考查考生分析題圖提取有效信息的能力；識(shí)記能力和理解所學(xué)知識(shí)要點(diǎn)，把握知識(shí)間內(nèi)在聯(lián)系的能力；能運(yùn)用所學(xué)知識(shí)解決生物學(xué)問題的能力．