Question

轉(zhuǎn)基因生物可用于生產(chǎn)人類所需要的藥用蛋白，如激素、抗體、疫苗、酶等．
如圖1是通過生物工程培育能產(chǎn)生人胰島素?zé)煵莸倪^程．請據(jù)圖回答：

（1）基因工程的核心步驟是

 

（填字母），此過程所需的工具酶是

 

．
（2）如圖2是運載體和反轉(zhuǎn)錄得到的胰島素基因的片段，已知限制酶Ⅰ的識別序列和切點是-G↓GATCC-，限制酶Ⅱ的識別序列和切點是-↓GATC-．GeneⅠ和GeneⅡ為質(zhì)粒上的標(biāo)記基因，根據(jù)圖分析，應(yīng)用限制酶

 

切割質(zhì)粒，用限制酶

 

切割目的基因．構(gòu)建的重組質(zhì)粒中，除含有外源基因、標(biāo)記基因外，還必須含有

 

和

 

．

（3）B過程中，常用

 

處理使細(xì)菌成為感受態(tài)細(xì)胞，從而利于重組質(zhì)粒的導(dǎo)入．
（4）如果從分子水平檢測人胰島素基因是否表達(dá)成功，可以采用

 

方法．

Answer 1

考點：基因工程的原理及技術(shù)

專題：

分析：分析圖1：A表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程；B表示將目的基因?qū)�入農(nóng)桿菌；C表示用選擇培養(yǎng)基篩選含有重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌；D表示采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞；E表示植物組織培養(yǎng)；F表示檢測過程．
分析圖2：限制酶Ⅰ的識別序列和切點是-G↓GATCC-，限制酶Ⅱ的識別序列和切點是-↓GATC-．因此限制酶Ⅱ也能作用于限制酶Ⅰ的識別序列．

解答： 解：（1）基因工程的核心步驟是基因表達(dá)載體的構(gòu)建，即A過程，該過程首先需要限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和運載體，還需用DNA連接酶將目的基因與運載體連接形成重組DNA分子．
（2）用限制酶Ⅱ切割質(zhì)粒時會將兩個標(biāo)記基因都破壞，因此只能選用限制酶Ⅰ切割質(zhì)粒，而切割含有目的基因的外源DNA分子時，只需用限制酶Ⅱ即可．構(gòu)建的重組質(zhì)粒中，除含有外源基因、標(biāo)記基因外，還必須含有啟動子和終止子．
（3）將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞時，常用感受態(tài)細(xì)胞法，即常用Ca²⁺處理使細(xì)菌成為感受態(tài)細(xì)胞，從而利于重組質(zhì)粒的導(dǎo)入．
（4）從分子水平上檢測目的基因是否表達(dá)成功，可以采用抗原-抗體雜交方法．
故答案為：
（1）A　限制酶和DNA連接酶
（2）ⅠⅡ啟動子　終止子
（3）Ca²⁺
（4）抗原-抗體雜交

點評：本題結(jié)合圖解，考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的原理及技術(shù)，掌握基因工程的具體操作步驟及相關(guān)細(xì)節(jié)，能根據(jù)圖中信息準(zhǔn)確答題，屬于考綱識記和理解層次的考查．