Question

在實驗室培養(yǎng)微生物，一方面需要為培養(yǎng)的微生物提供合適的營養(yǎng)和環(huán)境條件，另一方面需要確保無處不在的其他微生物無法混入．請回答下列相關(guān)問題：
（1）培養(yǎng)基能為培養(yǎng)的微生物提供營養(yǎng)．各種培養(yǎng)基的具體配方不同，但一般都含有

 

、

 

、

 

、

 

；另外，培養(yǎng)基還需要滿足微生物生長對

 

、

 

、

 

的要求．
（2）獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來雜菌的入侵．對實驗操作的空間、操作者的衣著和手，需進行清潔和

 

（填“消毒”或“滅菌”）；對用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等需進行

 

（填“消毒”或“滅菌”）．
（3）微生物接種的方法很多，其核心都是要防止雜菌的污染，保證培養(yǎng)物的純度．微生物接種最常用的方法是

 

和

 

．
（4）對分離的微生物作進一步的鑒定，常需要借助生物化學的方法．如在以

 

為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入

 

，可用來鑒定分解尿素的細菌；在以

 

為唯一碳源的培養(yǎng)基中加入

 

，可用來鑒定纖維素分解菌．

Answer 1

考點：微生物的分離和培養(yǎng)

專題：

分析：1．培養(yǎng)基的概念、種類及營養(yǎng)構(gòu)成
（1）概念：人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出的供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)．

（3）營養(yǎng)構(gòu)成：各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求．
2．無菌技術(shù)
（1）關(guān)鍵：防止外來雜菌的入侵．
（2）具體操作
①對實驗操作的空間、操作者的衣著和手進行清潔和消毒．
②將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進行滅菌．
③為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實驗操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進行．
④實驗操作時應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品接觸．
（3）消毒和滅菌

	消毒	滅菌
概念	使用較為溫和的物理或化學方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物（不包芽孢和孢子）	使用強烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所用的微生物（包括芽孢和孢子）
常用方法	煮沸消毒法、巴氏消毒法、化學藥劑消毒法、紫外線消毒法	灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌
適用對象	操作空間、某些液體、雙手等	接種環(huán)、接種針、玻璃器皿、培養(yǎng)基等

3、制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的方法：計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板．
4、接種方法：平板劃線法和稀釋涂布法．
（1）平板劃線操作：
①挑取他含菌樣品：選用平整、圓滑的接種環(huán)，按無菌操作法挑取少量菌種．
②劃A區(qū)：將平板倒置于煤氣（酒精）燈旁，左手拿出皿底并盡量使平板垂直于桌面，有培養(yǎng)基一面向著煤氣燈（這時皿蓋朝上，仍留在煤氣燈旁），右手拿接種環(huán)先在A區(qū)劃3-4條連續(xù)的平行線（線條多少應(yīng)依挑菌量的多少面定）．劃完A區(qū)后應(yīng)立即燒掉環(huán)上的殘菌，以免因菌過多而影響后面各區(qū)的分離效果．在燒接種環(huán)時，左手持皿底并將其覆蓋在皿蓋上方（不要放入皿蓋內(nèi)），以防止雜菌的污染．
③劃其他區(qū)：將燒去殘菌后的接種環(huán)在平板培養(yǎng)基邊緣冷卻一下，并使B區(qū)轉(zhuǎn)到上方，接種環(huán)通過A區(qū)（菌源區(qū)）將菌帶到B區(qū)，隨即劃數(shù)條致密的平行線．再從B區(qū)作C區(qū)的劃線．最后經(jīng)C區(qū)作D區(qū)的劃線，D區(qū)的線條應(yīng)與A區(qū)平行，但劃D區(qū)時切勿重新接觸A、B區(qū)，以免極該兩區(qū)中濃密的菌液帶到D區(qū)，影響單菌落的形成．隨即將皿底放入皿蓋中．燒去接種環(huán)上的殘菌．
④等平板凝固后，將平板倒置．
（2）稀釋涂布法：是將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，在適宜條件下培養(yǎng)．在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落．能夠測定樣品中活菌數(shù)的方法是：稀釋涂布平板法．

解答： 解：（1）各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求．
（2）獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來雜菌的入侵．對實驗操作的空間、操作者的衣著和手，需進行清潔和消毒，對用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等需進行滅菌．
（3）常用的接種方法有平板劃線法和稀釋涂布法．
（4）微生物的鑒定常用鑒別培養(yǎng)基，在尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，觀察是否變紅，可用來鑒定分解尿素的細菌；在以纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基中加入剛果紅，觀察是否有透明圈產(chǎn)生，可用來鑒定纖維素分解菌．
故答案為：（1）水、碳源、氮源、無機鹽   pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)、氧氣   
（2）消毒  滅菌
（3）平板劃線法  稀釋涂布法
（4）尿素  酚紅指示劑   纖維素  剛果紅

點評：本題主要考查微生物實驗室培養(yǎng)的相關(guān)知識，意在考查考生對相關(guān)知識的理解，把握知識間的內(nèi)在聯(lián)系的能力．