Question

4．為獲取可降解高鹽度工業(yè)廢水中有機(jī)物的耐鹽菌，研究人員進(jìn)行了如下實(shí)驗(yàn)：
①制備含3% NaCl的固體培養(yǎng)基，以及含3010、5%和7% NaCl以高鹽度工業(yè)廢水中有機(jī)物為碳源的液體培養(yǎng)基；
②將高鹽度廢水采用平板劃線法接種子含3% NaCl的固體培養(yǎng)基，如圖一．然后置于適宜條件下培養(yǎng)一段時(shí)間，觀察形成的菌落特征；
③將分離純化后的菌株接種到固體斜面培養(yǎng)基上，適宜條件下培養(yǎng)適當(dāng)時(shí)間，將試管置于4℃冰箱中保藏待用；
④取固體斜面上的菌株制成菌液，取等量菌液，分別加入到步驟①中制備的3組液體培養(yǎng)基中搖床培養(yǎng)35小時(shí)，定時(shí)取樣統(tǒng)計(jì)活菌數(shù)目．測(cè)定結(jié)果如圖二所示．

回答下列問(wèn)題：
（1）配制培養(yǎng)基時(shí)，滅菌、添加NaCl溶液和調(diào)節(jié)pH的先后順序是添加NaCI溶液、調(diào)節(jié)pH、滅菌．
（2）步驟②平板劃線操作過(guò)程中，第一次劃線前灼燒接種環(huán)的目的是防止雜菌污染，第二次及之后的幾次劃線前灼燒接種環(huán)的目的是殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種（使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來(lái)源于上次劃線的末端）．完成圖一所示操作，至少需要灼燒接種環(huán)6次．
（3）步驟④中常采用稀釋涂布平板法法統(tǒng)計(jì)活菌數(shù)目．直接從靜置的培養(yǎng)液中取樣計(jì)數(shù)的做法是錯(cuò)誤的，正確的操作是將培養(yǎng)液搖勻后取樣計(jì)數(shù)．若每種濃度設(shè)3個(gè)重復(fù)實(shí)驗(yàn)，每次統(tǒng)計(jì)活菌數(shù)目時(shí)，需要從9個(gè)培養(yǎng)瓶中取樣．
（4）由圖二可知，該耐鹽菌最適合處理含3%（濃度）NaCl的廢水．用該耐鹽菌處理較高鹽度工業(yè)廢水時(shí)，需要適當(dāng)延長(zhǎng)處理時(shí)間（增大接種量）（合理措施），才能達(dá)到理想效果．

Answer 1

分析 1、微生物常見(jiàn)的接種的方法
①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開(kāi)始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落．
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過(guò)大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落．
2、實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌方法
①灼燒滅菌：將微生物的接種工具，如接種環(huán)、接種針或其他金屬工具，直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒，可以迅速?gòu)氐椎販缇�，此外，在接種過(guò)程中，試管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通過(guò)火焰燃燒來(lái)滅菌；
②干熱滅菌：能耐高溫的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培養(yǎng)皿）和金屬用具等，可以采用這種方法滅菌；
③高壓蒸汽滅菌：將滅菌物品放置在盛有適量水的高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，為達(dá)到良好的滅菌效果，一般在壓力為100 kPa，溫度為121℃的條件下，維持15～30 min．

解答 解：（1）配制培養(yǎng)基時(shí)，需待各種營(yíng)養(yǎng)成分配制完成后再調(diào)節(jié)pH，最后進(jìn)行滅菌．
（2）平板劃線操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；劃線操作結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者．由于圖1中有5次劃線，每次劃線完需灼燒，再加上第一步灼燒，故完成圖一所示操作，至少需要灼燒接種環(huán)6次．
（3）據(jù)試驗(yàn)操作可知，步驟④中常采用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)活菌數(shù)目．取樣時(shí)不能直接從靜置的培養(yǎng)液中取樣計(jì)數(shù)，需將培養(yǎng)液搖勻后取樣計(jì)數(shù)．由于每種濃度設(shè)3個(gè)重復(fù)實(shí)驗(yàn)，共有3種不同濃度，故每次統(tǒng)計(jì)活菌數(shù)目時(shí)，需要從9個(gè)培養(yǎng)瓶中取樣．
（4）由圖二可知，該耐鹽菌 在3% NaCl最多，故最適合處理含 3% NaCl的廢水．用該耐鹽菌處理較高鹽度工業(yè)廢水時(shí)，需要適當(dāng)延長(zhǎng)處理時(shí)間，以增大接種量，才能達(dá)到理想效果．
故答案為：
（1）添加NaCI溶液、調(diào)節(jié)pH、滅菌
（2）殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種（使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來(lái)源于上次劃線的末端）    6
（3）稀釋涂布平板法     將培養(yǎng)液搖勻后取樣計(jì)數(shù)    9
（4）3%  適當(dāng)延長(zhǎng)處理時(shí)間（增大接種量）

點(diǎn)評(píng) 本題考查微生物的分離與培養(yǎng)、培養(yǎng)基的配制以及消毒和滅菌等有關(guān)方面的知識(shí)，意在考查學(xué)生對(duì)相關(guān)實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)原理、步驟、操作技能的掌握情況．