Question

14．科研人員以抗四環(huán)素基因?yàn)闃?biāo)記基因，通過(guò)基因工程的方法讓大腸桿菌生產(chǎn)鼠的β-珠蛋白，治療鼠的鐮刀型細(xì)胞貧血癥．下列相關(guān)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中，不合理的是（　　）

• A． 用β-珠蛋白編碼序列加啟動(dòng)子、抗四環(huán)素基因等元件來(lái)構(gòu)建基因表達(dá)載體
• B． 利用小鼠DNA分子通過(guò)PCR克隆出β-珠蛋白基因的編碼序列
• C． 用含有四環(huán)素的培養(yǎng)基篩選出已經(jīng)導(dǎo)入β-珠蛋白編碼序列的大腸桿菌
• D． 用Ca²⁺處理大腸桿菌后，將表達(dá)載體導(dǎo)入具有四環(huán)素抗性的大腸桿菌中

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：A、基因表達(dá)載體的組成包括啟動(dòng)子、目的基因、標(biāo)記基因和終止子，因此用β-珠蛋白編碼序列加啟動(dòng)子、抗四環(huán)素基因等元件來(lái)構(gòu)建基因表達(dá)載體，A正確；
B、利用小鼠DNA分子通過(guò)PCR克隆出β-珠蛋白基因的編碼序列，B正確；
C、標(biāo)記基因是四環(huán)素抗性基因，因此用含有四環(huán)素的培養(yǎng)基篩選出已經(jīng)導(dǎo)入β-珠蛋白編碼序列的大腸桿菌，C正確；
D、標(biāo)記基因是四環(huán)素抗性基因，因此受體細(xì)胞不能具有四環(huán)素抗性，即用Ca²⁺處理大腸桿菌后，將表達(dá)載體導(dǎo)入不具有四環(huán)素抗性的大腸桿菌中，D錯(cuò)誤．
故選：D．

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的概念、原理、操作步驟等，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確判斷各選項(xiàng)．