Question

（1）有些細菌可分解原油，從而消除由原油泄漏造成的土壤污染．某同學(xué)欲從污染的土壤中篩選出能高效降解原油的菌株．回答問題：
①培養(yǎng)基的滅菌是將培養(yǎng)基放在溫度為

 

壓力為

 

的高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)

 

分鐘．
②在篩選過程中，應(yīng)將土壤樣品稀釋液接種于以

 

為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上．
③純化菌種時，為了得到單菌落，常采用的兩種接種方法是

 

．
④為了篩選出高效菌株，可比較單菌落周圍透明區(qū)的大小，透明區(qū)大說明該菌株的降解能力

 

．
（2）常見的釀酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖來進行酒精發(fā)酵，而自然界中某些酵母菌能分解木糖產(chǎn)生酒精，但是對酒精的耐受能力差．科學(xué)家利用基因工程培育了能利用這兩種糖進行發(fā)酵且對酒精耐受能力強的釀酒酵母．將自然界中采集到的葡萄帶回實驗室，用無菌水將葡萄皮上的微生物沖洗到無菌的三角瓶中，然后將瓶中的液體接種于固體培養(yǎng)基上，在適宜的條件下培養(yǎng)，獲得各種菌落．
①將培養(yǎng)基上的酵母菌菌株轉(zhuǎn)接到

 

的培養(yǎng)基中，無氧條件下培養(yǎng)一周后，有些酵母菌死亡，說明這些酵母菌不能利用木糖發(fā)酵．從存活的酵母菌中提取DNA，經(jīng)大量擴增獲得目的基因．
②將目的基因連接到質(zhì)粒上，該質(zhì)粒具有尿嘧啶合成酶基因作為標記基因．將重組質(zhì)粒導(dǎo)入酵母菌時，應(yīng)選擇缺乏

 

能力的釀酒酵母作為受體菌．
③將上述獲得的轉(zhuǎn)基因釀酒酵母接種在以

 

為碳源的培養(yǎng)基中進行發(fā)酵能力測試．隨著發(fā)酵的持續(xù)進行，若該釀酒酵母能夠存活，說明它能

 

，即說明所需菌株培育成功．

Answer 1

考點：微生物的利用,培養(yǎng)基對微生物的選擇作用

專題：

分析：高壓蒸汽滅菌的條件是壓力升至102.9kPa（1.05kg/cm²），溫度達121～126℃，維持20～30分鐘．篩選能夠分解原油的微生物需要使用一原油為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基．常用的固體培養(yǎng)基上的接種方法主要有平板劃線法和稀釋涂布平板法．篩選能夠利用木糖的酵母菌需要使用木糖為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基．

解答： 解：（1）①高壓蒸汽滅菌的條件是壓力升至102.9kPa（1.05kg/cm²），溫度達121～126℃，維持20～30分鐘．
②篩選能降解原油的菌株，可以將樣品稀釋液置于以原油為唯一碳源的固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)．
③菌株的接種方法，常用的有兩種：平板劃線法和稀釋涂布平板法．
④菌株分解周圍的營養(yǎng)物質(zhì)，出現(xiàn)分解圈，分解圈大說明該菌株的降解能力強
（2）①在以木糖為唯一碳源的培養(yǎng)基中，只有能分解木糖的酵母菌能生存，可以用來選擇能分解木糖的酵母菌．
②利用質(zhì)粒標記基因表達的標記性狀可以判斷目的基因是否成功導(dǎo)入受體細胞，故應(yīng)該選擇缺乏尿嘧啶合成能力的釀酒酵母作為受體菌．
③轉(zhuǎn)基因釀酒酵母能利用這葡萄糖和木糖進行發(fā)酵且對酒精耐受能力強，故應(yīng)該接種在以葡萄糖和木糖為碳源的培養(yǎng)基中進行發(fā)酵能力測試．隨著發(fā)酵的持續(xù)進行，若該釀酒酵母能夠存活，說明它能利用葡萄糖和木糖產(chǎn)生酒精，且對酒精的耐受能力強．
故答案為：
（1）①121℃；1.05kg/cm²   15
②原油
③平板劃線法和稀釋涂布平板法
④強
（2）①以木糖為唯一碳源
②尿嘧啶合成
③葡萄糖和木糖     利用葡萄糖和木糖產(chǎn)生酒精，且對酒精耐受能力強

點評：本題主要考查微生物的篩選與分離，意在強化學(xué)生對微生物篩選的過程的理解與運用．