Question

3．Rag₂基因缺失小鼠不能產(chǎn)生成熟的淋巴細(xì)胞．科研人員利用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）對(duì)Rag₂基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療，其技術(shù)流程如圖．請(qǐng)回答：

（1）在上皮細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，應(yīng)使用胰蛋白酶或膠原蛋白酶將細(xì)胞分散開(kāi)制成細(xì)胞懸液，培養(yǎng)基的成分除無(wú)機(jī)鹽、糖、氨基酸、核苷酸微量元素等營(yíng)養(yǎng)成分外通常還需要加入血清、血漿．為了防止培養(yǎng)過(guò)程中的污染，細(xì)胞培養(yǎng)液中需添加一定量的抗生素；為了便于清除代謝產(chǎn)物，防止細(xì)胞產(chǎn)物的積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害，應(yīng)定期更換培養(yǎng)液．
（2）核移植的受體卵母細(xì)胞應(yīng)培養(yǎng)至MII中期，此時(shí)應(yīng)先去除卵母細(xì)胞的細(xì)胞核．
（3）ES細(xì)胞可由囊胚的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)分離培養(yǎng)獲得，它的功能特點(diǎn)是發(fā)育的全能性，人類(lèi)可以對(duì)其進(jìn)行誘導(dǎo)分化形成造血干細(xì)胞．
（4）基因?qū)�入之前必須�?gòu)建基因表達(dá)載體，基因表達(dá)載體的組成要有目的基因、啟動(dòng)子和終止子、標(biāo)記基因等．
（5）該治療方式屬于體外（體內(nèi)、體外）基因治療．

Answer 1

分析 1、動(dòng)物核移植的概念：將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核移入一個(gè)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎，這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育為動(dòng)物個(gè)體．
2、胚胎干細(xì)胞簡(jiǎn)稱ES或EK細(xì)胞，來(lái)源于早期胚胎或原始性腺（即囊胚期的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)）．
3、在基因工程中，目的基因和質(zhì)粒需要用同種限制酶進(jìn)行切割，形成相同的黏性末端，再用DNA連接酶連接成重組質(zhì)粒．
4、目的基因分子水平上的檢測(cè)：
①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)
②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)
③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)
分析題圖：圖示是利用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）對(duì)干擾素基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療的流程，其中①表示獲得重組胚胎的過(guò)程；②表示早期胚胎培養(yǎng)過(guò)程；③表示采用基因工程技術(shù)將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞．

解答 解：（1）在利用上皮細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，可用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理，以消化組織細(xì)胞間的蛋白質(zhì)，得到單個(gè)細(xì)胞．營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)除了糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽、微量元素等，還需加入血清、血漿等天然物質(zhì)．為了防止細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)菌的污染，可向培養(yǎng)液中加入適量的抗生素．為了便于清除代謝產(chǎn)物，防止細(xì)胞產(chǎn)物的積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害，應(yīng)定期更換培養(yǎng)液．
（2）動(dòng)物體細(xì)胞核移植的受體細(xì)胞是處于減數(shù)第二次分裂中期（MII中期）的卵母細(xì)胞，且要去除其細(xì)胞核．
（3）重組胚胎培養(yǎng)到囊胚期時(shí)，可從其內(nèi)細(xì)胞團(tuán)中分離出ES細(xì)胞．ES細(xì)胞具有發(fā)育的全能性，人類(lèi)可以對(duì)其進(jìn)行誘導(dǎo)分化形成造血干細(xì)胞．
（4）基因表達(dá)載體由啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因和目的基因組成．
（5）根據(jù)圖形分析可知該治療方式屬于體外基因治療．
故答案為：
（1）胰蛋白酶或膠原蛋白酶  血清、血漿    抗生素  培養(yǎng)液
（2）MII中   細(xì)胞核
（3）內(nèi)細(xì)胞團(tuán)  發(fā)育的全能性   誘導(dǎo)分化
（4）標(biāo)記基因   啟動(dòng)子   體外

點(diǎn)評(píng) 本題結(jié)合利用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）對(duì)干擾素基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療的流程圖，綜合考查基因工程、細(xì)胞工程和胚胎工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記細(xì)胞工程的操作步驟及相關(guān)細(xì)節(jié)；識(shí)記核移植技術(shù)的過(guò)程及應(yīng)用；識(shí)記胚胎干細(xì)胞的來(lái)源及特點(diǎn)，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題．