Question

17．如圖為我國首例綠色熒光蛋白（GFP）轉(zhuǎn)基因克隆豬的培育過程示意圖，據(jù)圖回答：

（1）圖中通過過程①、②形成重組質(zhì)粒，需要限制酶切取目的基因、切割質(zhì)粒．限制酶Ⅰ的識別序列和切點是-G↓GATCC-，限制酶Ⅱ的識別序列和切點是-↓GATC-．在質(zhì)粒上有酶Ⅰ的一個切點，在目的基因的兩側(cè)各有1個酶Ⅱ的切點．在DNA連接酶的作用下，上述兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端能否連接？可以連接理由是因為由兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端是相同的．
（2）以上圖示中基因工程的核心是②（用序號表示），除了目的基因和標(biāo)記基因外，其上還應(yīng)包括啟動子和終止子．
（3）過程③將重組質(zhì)粒導(dǎo)入豬胎兒成纖維細(xì)胞時，采用最多也最有效的方法是顯微注射技術(shù)．目的基因能否在受體母豬體內(nèi)穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵是目的基因是否插入到受體細(xì)胞的染色體DNA上．這需要檢測才能確定，檢測采用的方法是DNA分子雜交技術(shù)．
（4）目前科學(xué)家們通過蛋白質(zhì)工程制造出了藍(lán)色熒光蛋白，黃色熒光蛋白等，采用蛋白質(zhì)工程技術(shù)制造出藍(lán)色熒光蛋白過程的正確順序是：②①③④（用數(shù)字表示）．
①推測藍(lán)色熒光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸
②藍(lán)色熒光蛋白的功能分析和結(jié)構(gòu)設(shè)計序列
③藍(lán)色熒光蛋白基因的修飾（合成）
④表達出藍(lán)色熒光蛋白．

Answer 1

分析 根據(jù)題意和圖示分析可知：①表示目的基因的獲取，②表示基因表達載體的構(gòu)建，③表示將目的基因?qū)�入豬胎兒的成纖維細(xì)胞，經(jīng)過動物細(xì)胞培養(yǎng)篩選出轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞，然后該細(xì)胞與另一只豬的卵細(xì)胞進行細(xì)胞核移植獲得重組細(xì)胞．重組細(xì)胞經(jīng)過早期胚胎培養(yǎng)到桑椹胚或囊胚期，最后經(jīng)過胚胎移植技術(shù)將早期胚胎移植到代孕母豬子宮內(nèi)，最后生成轉(zhuǎn)基因克隆豬．由此可見，該過程中利用基因工程、動物細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞核移植、早期胚胎培養(yǎng)和胚胎移植等技術(shù)．

解答 解：（1）在DNA連接酶的作用下，上述兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端是相同的，所以能夠連接起來．
（2）基因工程的核心是基因表達載體的構(gòu)建．基因表達載體含有綠色熒光蛋白基因（目的基因）、啟動子、終止子和標(biāo)記基因．
（3）過程③將重組質(zhì)粒導(dǎo)入豬胎兒成纖維細(xì)胞時，采用最多也最有效的方法是顯微注射技術(shù)．目的基因能否在受體母豬體內(nèi)穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵是目的基因是否插入到受體細(xì)胞的染色體DNA上，這需要采用DNA分子雜交技術(shù)進行檢測才能確定．
（4）采用蛋白質(zhì)工程技術(shù)制造出藍(lán)色熒光蛋白過程的正確順序是：②藍(lán)色熒光蛋白的功能分析和結(jié)構(gòu)設(shè)計序列、①推測藍(lán)色熒光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸、③藍(lán)色熒光蛋白基因的修飾和④表達出藍(lán)色熒光蛋白．
故答案為：
（1）可以連接      因為由兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端是相同的
（2）②啟動子      終止子
（3）顯微注射技術(shù)  目的基因是否插入到受體細(xì)胞的染色體DNA上  DNA分子雜交技術(shù)
（4）②①③④

點評 本題考查基因工程和胚胎工程的相關(guān)知識，意在考查學(xué)生的識圖能力和判斷能力，運用所學(xué)知識綜合分析問題和解決問題的能力．