Question

8．為了得到普洱茶中產(chǎn)蛋白酶的微生物，研究人員進(jìn)行了一系列篩選、檢測．
（1）研究人員稱取普洱茶1g，加入99mL無菌水，制備稀釋10²倍的茶葉水．再將茶葉水進(jìn)行梯度稀釋，獲得A103、10⁴、10⁵倍的稀釋茶葉水．取100μL稀釋茶葉水，用（稀釋）涂布法接種到奶粉培養(yǎng)基，37℃條件下培養(yǎng)4-5天，在培養(yǎng)基中選擇菌落周圍的透明圈（或“水解圈”）較大的菌株作為目的菌株．
（2）將獲得的多個(gè)目的菌株接種于液體茶湯培養(yǎng)基中培養(yǎng)．已知氨基酸都能夠和茚三酮反應(yīng)生成藍(lán)紫色物質(zhì)，因此可以利用分光光度計(jì)測定茶湯中游離氨基酸的量．先用已知濃度的氨基酸溶液測定結(jié)果繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，再分別測定培養(yǎng)每個(gè)菌株的液體茶湯培養(yǎng)基的吸光值，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較，計(jì)算出該茶湯中游離氨基酸的量，氨基酸含量高的，即為蛋白酶產(chǎn)生量高的菌株．該實(shí)驗(yàn)中應(yīng)測定不接種（或“接種滅活菌株”）的液體茶湯培養(yǎng)基的游離氨基酸含量，作為對(duì)照組的數(shù)據(jù)．

Answer 1

分析 微生物常見的接種的方法：
①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落．
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落．

解答 解：（1）在稀釋涂布平板法中，首先對(duì)溶液進(jìn)行梯度稀釋，即稱取普洱茶1g，加入99mL無菌水，可制備稀釋10²倍的茶葉水．再將茶葉水進(jìn)行梯度稀釋，獲得A10³、10⁴、10⁵倍的稀釋茶葉水．取100μL稀釋茶葉水，用（稀釋）涂布法接種到奶粉培養(yǎng)基，37℃條件下培養(yǎng)4-5天，由于該茶葉中含有能夠產(chǎn)生蛋白酶的微生物，因此在培養(yǎng)基中選擇菌落周圍的透明圈（或“水解圈”）較大的菌株作為目的菌株．
（2）已知氨基酸都能夠和茚三酮反應(yīng)生成藍(lán)紫色物質(zhì)，因此可以利用分光光度計(jì)測定茶湯中游離氨基酸的量．先用已知濃度的氨基酸溶液測定結(jié)果繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，再分別測定培養(yǎng)每個(gè)菌株的液體茶湯培養(yǎng)基的吸光值，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較，計(jì)算出該茶湯中游離氨基酸的量，氨基酸含量高的，即為蛋白酶產(chǎn)生量高的菌株．該實(shí)驗(yàn)中應(yīng)測定不接種（或“接種滅活菌株”）的液體茶湯培養(yǎng)基的游離氨基酸含量，作為對(duì)照組的數(shù)據(jù)．
故答案為：
（1）99mL無菌水（稀釋）涂布透明圈（或“水解圈”）
（2）已知濃度的氨基酸溶液測定結(jié)果蛋白酶產(chǎn)生量高不接種（或“接種滅活菌株”）

點(diǎn)評(píng) 本題考查了微生物分離與純化的有關(guān)知識(shí)，要求考生能夠掌握微生物常見接種的方法，能夠根據(jù)題干信息篩選產(chǎn)蛋白酶高的微生物，再結(jié)合所學(xué)知識(shí)準(zhǔn)確答題．