Question

6．如表是幾種限制梅識別序列及其切割位點，（圖1、圖2中標注了相關限制酶的酶切位點，其中側位點先同的酶不重復標注．請回答下列問題：

限制酶	BamHI	BclI	Sau3A I	HindIII
識別序列及切割位點	G1GATC C C CTAG1G	T1GATC A A CTAG1T	1GATC CTAG1	A1AGCT T T TCGA1A

（1）圖1中啟動子是RNA聚合酶識別和結合的部位．氨芐青霉素抗性基因和四環(huán)素抗性基因作為標記基因，其作用是鑒別受體細胞中是否含有目的基因（以便篩選出含有目的基因的細胞）．
（2）用圖中質粒和目的基因構建重組DNA，應選用BclI和HindIII兩種限制酶切割，酶切后的載體和目的基因片段，通過DNA連接酶作用后獲得重組質粒．將重組質粒導入大腸桿菌時，先用Ca²⁺（或CaCl₂）處理細胞，使其處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的感受態(tài)細胞．
（3）一個基因表達載體的組成，除了圖1中質粒所示結構外，還應具有終止子和目的基因．
（4）為了篩選出轉入重組質粒的大腸桿菌，應在選擇培養(yǎng)基中添加四環(huán)素．若用Sau3k I切圖質粒最多可能獲得7種大小不同的DNA片段．

Answer 1

分析 分析圖1：外源DNA上含有限制酶BclI、BamHⅠ、HindIII和Sau3A I的切割位點，其中限制酶BclI、BamHⅠ、HindIII的識別序列都能被Sau3k I識別．
分析圖2：質粒上有限制酶BclI、BamHⅠ、HindIII三種限制酶的識別序列和切割位點，其中BamHⅠ的切割位點位于兩種抗生素抗性基因上．

解答 解：（1）啟動子是RNA聚合酶識別和結合的部位．標記基因的作用是鑒別受體細胞中是否含有目的基因（以便篩選出含有目的基因的細胞）．
（2）目的基因兩側有限制酶BclI、BamHⅠ、HindIII和Sau3A I的切割位點，若用限制酶BamHⅠ或Sau3A I切割會破壞質粒上兩種抗性基因，因此用圖中質粒和目的基因構建重組DNA時，應選用BclI和HindIII兩種限制酶切割，酶切后的載體和目的基因片段，通過DNA連接酶作用后獲得重組質粒．將目的基因導入微生物細胞時常有感受態(tài)細胞法，即先用Ca²⁺（或CaCl₂）處理細胞，使其處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的感受態(tài)細胞．
（3）基因表達載體的組成除了圖中的啟動子、標記基因（抗生素抗性基因）外，還有終止子和目的基因．
（4）由于選用BclI和HindIII兩種限制酶構建基因表達載體時，破壞了氨芐青霉素抗性基因，但沒有破壞四環(huán)素抗性基因，因此切割構建為了篩選出轉入重組質粒的大腸桿菌，應在選擇培養(yǎng)基中添加四環(huán)素．由于限制酶BclI、BamHⅠ、HindIII的識別序列都能被Sau3k I識別，因此用Sau3k I切圖質粒最多可能獲得7種大小不同的DNA片段．
故答案為：
（1）RNA聚合酶      鑒別受體細胞中是否含有目的基因（以便篩選出含有目的基因的細胞）
（2）BclI和HindIII      DNA連接酶         Ca²⁺（或CaCl₂）
（3）終止子     
（4）四環(huán)素      7

點評 本題結合基因結構圖和運載體結構圖，考查基因工程的技術和原理，重點是限制酶和DNA連接酶，要求考生認真分析圖1和圖2，能根據(jù)圖中和表中信息選擇合適的限制酶，準確判斷使用DNA連接酶連接的結果，再運用所學的知識答題．